[发明专利]一种用于检测可可球二孢的特异性引物及快速检测方法有效
| 申请号： | 201810386044.0 | 申请日： | 2018-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN108531639B | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 周游;黄俊生;杨腊英;汪军;郭立佳;刘磊;梁昌聪 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 陈欢 |
| 地址： | 571101 *** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性引物 快速检测 引物 植物病害 真菌 条带 病原菌 翻译延长因子 葡萄座腔菌 关键作用 区间序列 特异扩增 特异性强 灵敏度 检测 可用 扩增 物种 基因 发现 | ||
1.一种用于检测可可球二孢的特异性引物对，其特征在于，包括上游引物ZYLTF1和下游引物ZYLTR1，所述ZYLTF1和ZYLTR1的核苷酸序列分别为：
ZYLTF1：5'-acgcatgtcgttttttaa-3'，
ZYLTR1：5'-tacatgagtggtcagagcat-3'，
所述可可球二孢的拉丁名为Lasiodiplodia theobromae；
所述引物通过以下方式得到：利用一段翻译延长因子序列的变异区间序列设计上游引物ZYLTF1，所述变异区间序列为：acgcatgtcgttttttaacccctctcga，并根据翻译延长因子其它碱基序列设计下游引物ZYLTR1。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测可可球二孢的特异性引物对，其特征在于，所述引物ZYLTF1和ZYLTR1对可可球二孢特异性扩增出216bp的产物。
3.一种可可球二孢快速检测方法，其特征在于，以待测样品的DNA为模板，利用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，反应结束后对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出216bp的产物，即判定样品中存在可可球二孢。
4.根据权利要求3所述的一种可可球二孢快速检测方法，其特征在于，所述待测样品为可可球二孢或者疑似感染了可可球二孢的植物组织。
5.根据权利要求3所述的一种可可球二孢快速检测方法，其特征在于，引物扩增的反应体系为：10μmol/L上游引物和下游引物各1μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，模板DNA 1μL，无菌超纯水9.5μL；所述2×Taq PCR Master Mix包括0.05U/μL的Taq DNA聚合酶、10×Buffer、4mmol/L的Mg2+和0.4mmol/L的dNTPs。
6.根据权利要求3所述的一种可可球二孢快速检测方法，其特征在于，扩增的反应程序为：
94℃预变性3min；94℃变性45s，58℃退火45s，72℃延伸1min；循环35次；72℃终延伸10min。
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