[发明专利]一种棉铃虫CYP4L11基因的dsRNA及其应用

说明书

本发明涉及农业害虫防治领域，具体地，涉及一种棉铃虫CYP4L11基因的dsRNA及其应用。本发明的棉铃虫CYP4L11基因的dsRNA，其中一条链的核苷酸序列与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有至少80％的同源性。本发明还提供了所述dsRNA的编码基因。本发明还提供了所述dsRNA或其编码基因在防治棉铃虫方面的应用。本发明通过RNAi手段干扰细胞色素P450酶，增加棉铃虫对棉酚的敏感性，可以做到对棉铃虫特异、绿色防控。

技术领域

本发明涉及农业害虫防治领域，具体地，涉及一种棉铃虫CYP4L11基因的dsRNA及其应用。

背景技术

棉铃虫是世界范围内的一种杂食性害虫，严重危害了我国农作物的产量和质量。目前控制棉铃虫主要是通过种植转基因棉以及施用农药这两种手段，但是随着转基因棉种植范围的扩大，许多地区的棉铃虫已经对转基因棉花产生抗性，防治棉铃虫仍然要依赖化学农药。然而大量化学农药的施用会引起害虫抗药性增强，同时污染环境、破坏生态甚至会带来一系列的食品安全问题。所以发展环境友好型、靶标特异的害虫防治策略已经迫在眉睫。

双链RNA(dsRNA)介导的基因沉默通常称为RNA干扰(RNAi)，其作用机制是通过阻止同源基因的翻译或者转录而实现基因沉默。RNAi技术具有特异性高、操作方便等特点，已经在农业害虫防治中得到了应用。例如：Baum等(2007)通过转基因玉米表达液泡ATP酶基因dsRNA，导致取食转基因玉米的玉米根叶甲发育迟缓、死亡率升高；Mao等(2007)研究发现棉铃虫取食表达dsCYP6AE14的转基因棉花后，幼虫出现生长发育迟缓，最后死亡的现象。由此可见RNAi技术防治农业害虫具有可行性。

棉酚是棉花产生的植物次生代谢物之一，对许多生物体具有毒性。在棉酚胁迫下，棉铃虫通过诱导高表达包括细胞色素P450在内的解毒代谢酶等方式来进行自我保护。细胞色素P450酶系是一种广泛存在于生物体中的多功能氧化酶，可以代谢多种内源、外源化合物。因此，通过干扰关键CYP基因的表达，增加棉铃虫对棉酚的敏感性，可以达到防控棉铃虫的目的。

发明内容

针对现有技术不足，本发明的一个目的是提供一种棉铃虫CYP4L11基因的dsRNA。

本发明的棉铃虫CYP4L11基因的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA的其中一条链的核苷酸序列与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有至少80％的同源性。进一步优选地，所述dsRNA的其中一条链的核苷酸序列与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有至少95％的同源性。

本发明还提供了上述dsRNA的编码基因。例如但不限于，核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的编码基因。

本发明还提供了含上述dsRNA或其编码基因的重组表达载体、重组微生物(例如重组菌株)、转基因细胞系、转基因植物或试剂盒(例如含上述dsRNA或其编码基因表达盒的表达试剂盒)等产品。

本发明还提供了上述dsRNA的制备方法，包括以下步骤：

1)取棉铃虫总RNA，通过RT-PCR得到cDNA；

2)通过PCR技术扩增目的基因片段：设计带有T7序列的特异性引物，以第一步得到的cDNA为模板，得到带有T7序列和目的基因片段的PCR产物；

3)采用试剂盒T7High Yield RNA Transcription Kit制备dsRNA。