[发明专利]Sj13多肽及其在制备抗血栓药物中的应用

说明书

本发明公开了一种来源于日本血吸虫的Sj13多肽及其突变体，采用基因工程技术，获得重组多肽Sj13及其突变体；经APTT，PT和TT凝血功能检测，鉴定出Sj13及其突变体具有较好的体外抗凝功能；经酶动力学实验检测，发现Sj13多肽及其突变体具有抑制凝血相关因子XIa，Xa和Plasmin的功能；经小鼠FeCl₃损伤颈总动脉血栓模型，发现Sj13抑制颈总动脉血栓形成，具有抗血栓功能，且出血风险较低。Sj13多肽及其突变体具有重要的抗凝血/抗血栓药物开发和应用价值。

技术领域

本发明属于基因工程和生物医药医疗领域，具体涉及来源于日本血吸虫的Sj13多肽及其突变体，及其在制备抗凝血、抗血栓药物中的应用。

背景技术

血栓形成可引起相应组织和器官缺血、缺氧、坏死(动脉血栓)以及淤血、水肿(静脉血栓)，这严重的威胁着人们的生命健康。动脉血栓形成是造成90％以上的心肌梗死，80％脑卒中的主要原因，动脉栓塞性心脑血管疾病是导致人类死亡首要因素。静脉血栓栓塞(VTE),包括深静脉血栓(DVT)和肺栓塞(PE)，是继心梗和中风后位列第3位的心血管相关性疾病的死亡原因。全球每年确诊VTE患者约数百万人，在美国，据不完全统计每年发生VTE超过90万例，其中约30万例死于肺栓塞。在欧洲，每年发生112万例VTE，PTE54.3万例，是VTE相关死亡猝死的主要原因之一，约占院内死亡的5％-10％。在我国，1997年-2008年，24个地区60多家三甲医院针对PTE的统计数据显示，住院患者PE的发生率逐年上升，至2008年约为0.1％。另外，2006年-2010年28个省自治区205家医院针对特定人群，包括重症监护病房(ICU)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺癌、老年内科住院患者以及妇产科大手术患者，进行了VTE的流行病学调查，结果显示其发病率分别为27％，9.7％，11.5％，9.7％。由此可见，在中国人群中，VTE的发病率甚至与欧美相当，该病在中国乃至亚洲被严重低估。因此，血液凝固异常导致栓塞性疾病，是危害人类健康的主要杀手。

抗凝血药物作为预防和治疗静脉血栓的主流药物，可追溯到传统抗凝药肝素和华法林的使用，距今已有70多年的历史。

1955年F.Markward发现欧洲医用水蛭有抗凝特性，命名为水蛭素。由于水蛭素有严重的出血副作用，2000年12月15日Medicines公司经FDA批准，在美国上市了其研发的水蛭素衍生物，比伐卢定(Bivalirudin)，它有20个肽合成，与凝血酶的结合是可逆的。随后，阿斯利康公司研发出第一个可以直接口服的凝血酶抑制剂，它是类似纤维蛋白肽A的2肽，能迅速、可逆、竞争性的与凝血酶结合。但是因为其服用后可出现严重肝功能损害，该公司于2006年2月世界范围内将该药撤出市场。但是，2008年4月由德国勃林格殷格翰公司研发的新型直接抑制凝血酶的口服抗凝剂达比加群酯却在德国和英国上市销售，2010年10月在美国经FDA批准上市，是继华法林之后，首个新型口服抗凝剂。

1987年Tuszynski等人从墨西哥水蛭的唾液腺中分离出第一个FⅩ抑制剂，1990年Waxman等人从非洲吨缘蜱虫唾液腺分离出另一个FⅩ抑制剂蜱虫肽(TPA)，1998年Bayer公司启动了FⅩa抑制剂研发项目，参照蜱虫肽(TPA)的结构，共筛选出200,000个化合物，从中选出了13个先导化合物，1999年Rivaroxaban(利伐沙班)被发现。2008年9月和10月分别在加拿大和欧盟获准上升销售，用于择期髋、膝关节置换和成人VTE的预防。2009年3月31日获得中国食品药品监督管理局(SFDA)的批准，在我国上市销售，用于择期髋、膝关节置换和成人VTE的预防。利伐沙班是全球首个口服直接FⅩa抑制剂，可以抑制游离和结合状态的FⅩa，且有高度的选择性。自此之后，辉瑞和百时美施贵宝公司联合开发了Apixaban(阿哌沙班)，分别与2011年5月和2012年12月在欧盟和美国上市销售，2013年获准在我国上市销售。日本一三共株式会社研发了Edoxaban(依度沙班)，2011年分别在日本和我国上市销售。