[发明专利]一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法

说明书

本发明公开了一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法，步骤是：（1）母本材料选取；（2）外植体处理：以母本幼嫩叶片的叶脉作组培外植体，将叶片从母本剪下后，用自来水冲洗；依次使用酒精浸泡，灭菌水冲洗，双氧水浸泡，灭菌水冲洗；将叶脉沿其边缘剪切；（3）启动培养：将切割好的叶脉水平接入启动培养基，放入培养室培养；（4）愈伤组织分化培养：启动培养结束，叶脉边缘形成愈伤组织，转接入愈伤组织分化培养基；（5）不定芽诱导培养：愈伤组织分化培养结束，愈伤组织增大，转接入培养基进行不定芽诱导培养，愈伤组织上诱导分化出不定芽。本方法易行，操作简便，降低了外植体褐化率，提高了愈伤组织诱导率，改善了红掌组培技术。

技术领域

本发明属于园艺植物组培技术领域，特别涉及一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法，该方法适用于红掌组培过程中不定芽的诱导分化。

技术背景

红掌(Anthurium andraeanum)，又称为安祖花或花烛，是一种经济效益较高的热带花卉植物。其花形奇特优美、花色鲜艳、花期特长，是各种场所的花卉装饰佳品。随着人民生活水平的不断提高，红掌在居家生活、礼仪交往、活动庆典等领域消费量不断增加，从而市场对红掌的需求量也在不断扩大。

利用组培技术繁育的植株后代保持了母本的优良性状，同时可以大量、快速地进行后代高效繁育，并且能够周年进行种苗繁育生产。

不定芽发生型是植物组培器官形成方式的重要类型之一，亦是红掌组培快繁器官形成的主要方式。通过此种器官形成方式，外植体首先经过脱分化形成愈伤组织，然后愈伤组织经过再分化形成不定芽。因此，愈伤组织诱导是组培过程中的首要环节，只有减少组培过程中外植体褐化现象的发生和提高愈伤组织诱导率，获得更多的愈伤组织，才能保证大量地形成不定芽。

目前，在商业化红掌种苗繁育生产中主要采用组培技术进行，国内外亦有大量的红掌组培技术领域研究，但都存在着外植体褐化现象严重、愈伤组织诱导率低的问题，也尚未检索到利用红掌叶脉作外植体的组培方法报道。此外，在商业化红掌组培生产中，若采用叶片作外植体，通常都会将叶脉除弃之，也造成了资源的浪费。

发明内容

本发明目的是在于提供了一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法，该方法解决了红掌愈伤组织诱导培养过程中外植体容易褐化和愈伤组织诱导率低的问题，通过利用红掌叶脉作外植体，培养过程中外植体褐化率大大降低，褐化率减少了23.5～41.4％，愈伤组织诱导率大大增加，诱导率高达97.6％，从而进一步增加了后代增殖数量，方法易行，操作简便，降低了外植体褐化率，提高了愈伤组织诱导率，改善了红掌组培技术。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种利用红掌叶脉诱导分化不定芽的组培方法，其步骤是：

(1)母本材料选取：选取生长健壮、株型优美红掌植株作为母本材料。

(2)外植体处理：以母本幼嫩叶片的叶脉作组培外植体。将叶片从母本剪下后，用自来水冲洗20～30min，期间用手轻轻搓揉叶片表面。之后，在超净工作台上依次使用70～75％(体积比)酒精浸泡30～60s，灭菌水冲洗2～3遍，10～12％(体积比)双氧水溶液浸泡10～20min，灭菌水冲洗3～5遍。将叶脉沿其边缘剪切，并切割成1cm长小段待用。

(3)启动培养：将切割好的叶脉水平接入1号培养基，放入培养室培养。

(4)愈伤组织分化培养：启动培养30～60d后，叶脉边缘即形成愈伤组织，转接入2号培养基。

(5)不定芽诱导培养：愈伤组织分化培养30～60d后，愈伤组织增大，表面可见点状突起，转接入3号培养基。不定芽诱导培养30～60d后，即可见愈伤组织上诱导分化出1～2cm高不定芽。