[发明专利]一种拮抗木霉菌活体快速筛选方法

说明书

本发明提供了一种拮抗木霉菌活体快速筛选方法，包括如下步骤：A、将催芽后的植物种子置于木霉孢悬液中浸泡一定时间后，吸干植物种子表面附着的木霉孢悬液；B、将步骤A处理后的植物种子的胚根向下置于病原菌接种液中，恒温光照培养，出苗；C、将出苗后的植物子叶的面积S1进行扫描后，同对照组未接种病菌及木霉菌的子叶面积S2相对比。比值越大则对应木霉菌拮抗性越强，从而筛选得到拮抗性优良的木霉菌株。本发明通过采用多孔板结合菌落面积扫描仪来筛选拮抗木霉，该方法筛选结果与盆栽筛选结果有较高的相关性。

技术领域

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及的是一种拮抗木霉菌活体快速筛选方法。

背景技术

木霉菌作为一种重要的生物防治微生物，对多种植物病害有较好的防治效果，已在田间得到广泛的应用。然而要获得优良的拮抗木霉菌需要通过离体和活体条件下多步的筛选。传统的筛选方法主要包括：平板初筛、盆栽复筛及大田试验三个步骤。其中盆栽复筛是检验木霉菌株生防潜力的一个重要环节，工作量较大，试验时间较长。如果初筛获得的候选木霉菌株较多，盆栽复筛将会耗费较多的人力和物力。大量实践表明：盆栽复筛和平板初筛结果经常相关性不理想。这可能是由于木霉菌的生防效果的发挥涉及植物-木霉菌-病原菌-环境四方间的相互作用，而平板初筛仅涉及木霉菌与病原菌两者之间的关系，造成两者筛选结果存在差别。由此需要一种能够基本充分反映盆栽复筛效果的活体苗快速筛选优良菌株的方法，从而大幅度减少盆栽复筛工作量，提高优良菌株筛选效率。

发明内容

本发明的目的在于针对传统拮抗木霉菌复筛效率较低的难题，提供一种拮抗木霉菌活体快速筛选方法，解决了拮抗木霉菌复筛速度慢的难题。本发明提供的拮抗木霉菌株的活体筛选方法能有效的减少盆栽复筛的工作量，同时筛选结果可靠。具有较强的开发应用潜力。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种拮抗木霉菌活体快速筛选方法，所述筛选方法包括如下步骤：

A、将催芽后的植物种子置于木霉孢悬液中浸泡一定时间后，吸干植物种子表面附着的木霉孢悬液；

B、将步骤A处理后的植物种子的胚根向下置于病原菌接种液中，恒温光照培养，出苗；

C、将出苗后的植物子叶的面积S1进行扫描后，筛选得到优良的拮抗木霉菌活体。子叶面积越大则对应木霉菌拮抗性越强。

所述子叶面积为子叶展开后的面积。

优选地，步骤A中，所述木霉孢悬液的浓度为10⁵-10⁶个/ml；所述浸泡时间为12-20h。

优选地，所述木霉孢悬液为：使用无菌水冲洗培养基上活化4d的木霉菌孢子，菌液用已灭菌的滤纸过滤以除去菌丝，得到的孢子悬液。

优选地，步骤A中，所述催芽处理具体为：将植物种子25℃下催芽2d，至胚根露出1cm左右。

优选地，步骤B中，所述病原菌接种液的制备方法如下：

将活化后的病原菌打取菌饼，转移至PD液体培养基中发酵培养，所得发酵液离心获得病原菌发酵上清液；然后将病原菌发酵液上清液与MS培养基1:4-5混合，即得。

优选地，所述病原菌为真菌，且能在植物苗期进行侵染并引起叶片发病。

优选地，所述发酵培养的温度为25-28℃，采用的摇床转速为160-180r/min。

优选地，步骤B中，所述培养时间为4-6d，培养的光照强度为4000lx，培养的环境相对湿度为70-80％(采用恒温培养箱，光照16h/黑暗8h)。

优选地，所述植物种子为黄瓜种子，优选黄瓜品种为夏丰2号；病原菌为黄瓜炭疽病菌。