[发明专利]EpCAM单域抗体E6

说明书

本发明属于分子生物学领域，具体涉及EpCAM单域抗体E6，利用噬菌体展示技术，通过从驼源免疫的单域重链抗体库中筛选能与靶标抗原EpCAM特异性结合的单域重链抗体库，并进一步将编码该抗体的基因序列克隆至原核表达载体中，获得高效表达的EpCAM单域抗体。能够显著提高单域抗体的特异性结合性能，为EpCAM的免疫导向治疗临床提供基础。

技术领域

本发明涉及EpCAM单域抗体及其制备方法，属于分子生物学领域。

背景技术

EpCAM是指上皮细胞黏附分子(Epithelial Cell Adhesion Molecule,)，又称CD326，是一类广泛表达于人上皮组织的糖蛋白，具有非常强效的抗原表位。EpCAM不仅具有表皮细胞黏附分子功能，还参与加快细胞周期，促进细胞增殖、分化、迁移以及免疫逃逸等多重生命活动。

研究表明，EpCAM通过参与β-catenin依赖的Wnt级联反应激活c-myc、cyclinA/E等原癌基因的表达，导致肿瘤发生。

生理状态下，EpCAM不同程度地表达于除鳞状上皮细胞之外的所有的正常上皮中，且多位于细胞间紧密连接处。病理状态下，EpCAM几乎表达于所有的腺癌中，包括结直肠癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌等。EpCAM的表达与肿瘤的进展及预后相关，可作为肿瘤诊断的可靠标志和治疗靶点。

EpCAM是目前表达最强和最广泛的肿瘤表面抗原之一，所以EpCAM可能作为大多数肿瘤的免疫治疗靶点，引发广泛关注。由于EpCAM抗体特异性差、结合力低等原因，EpCAM的免疫导向治疗临床试验结果不甚理想，目前还处在初期阶段。因此，高质量特异性抗体的研发是EpCAM能够用于肿瘤诊断、治疗的关键。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中EpCAM的免疫导向治疗临床试验结果不甚理想等问题，公开一种EpCAM单域抗体。

本发明的另一目的是，提供一种EpCAM单域抗体的制备方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

EpCAM单域抗体，其包括两条如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的VHH链。

其中EpCAM单域抗体是指针对EpCAM的能与EpCAM特异性结合的单域抗体。

本发明同时还公开如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的VHH链。并且进一步公开该序列包括框架区FR和互补决定区CDR，其中框架区FR包括SEQ ID NO:2所示的FR1、SEQ ID NO:3所示的FR2、SEQ ID NO:4所示的FR3、以及SEQ ID NO:5所示的FR4；互补决定区CDR包括SEQID NO:6所示的CDR1、SEQ ID NO:7所示的CDR2、以及SEQ ID NO:8所示的CDR3。

并且本发明进一步公开能够用于编码上述的如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的VHH链及该VHH链组成的EpCAM单域抗体的多核苷酸，该多核苷酸的核苷酸序列如SEQ IDNO：9所示；或者该多核苷酸的核苷酸序列与SEQ ID NO：9具有60%以上同一性，且可用于编码如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的VHH链及该VHH链组成的EpCAM单域抗体。

这里所说的与SEQ ID NO：9具有60%以上同一性，且可用于编码如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的VHH链及该VHH链组成的EpCAM单域抗体是指：该核苷酸序列与SEQ ID NO：9具有70%、80%、85%、88%、90%、95%、99%以上同一性，并且所形成的核苷酸序列可以用以编码形成SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。