[发明专利]杂交瘤细胞株、CD31单克隆抗体、制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种杂交瘤细胞株、CD31单克隆抗体、制备方法及应用，该单克隆抗体采用纯化的CD31重组胞外区蛋白作为免疫原免疫动物体；将骨髓瘤细胞SP2/0与免疫后的所述动物体的B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞；筛选特异性杂交瘤细胞阳性克隆，对所述阳性克隆进行细胞克隆化，筛选出稳定分泌CD31单克隆抗体的杂交瘤细胞。其分泌产生的抗人CD31单克隆抗体具有特异性强、亲和力高、稳定性好、效价高的特点。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，并且更具体地，涉及到一种可产生CD31单克隆抗体的杂交瘤细胞株，CD31单克隆抗体，以及该抗体的制备方法和应用。

背景技术

白细胞分化抗原31，(Cluster Of Differentiation 31，CD31)，是一种分子量为130KDa的糖蛋白，也称为血小板内皮细胞粘附因子-1(PECAM)。

CD31蛋白主要表达于内皮细胞的胞质和胞膜，血小板、单核细胞、粒细胞、B淋巴细胞也有表达，常用于良、恶性血管源性肿瘤的诊断和鉴别诊断，也可用于各种肿瘤间质中血管生成的研究。CD31抗体染色血管内皮细胞后，可清楚地确定肿瘤血管的轮廓，能够容易地找到血管，从而减少寻找范围，提高检验效率。

研究发现，肿瘤的生长与转移依赖于肿瘤新生血管的形成，恶性肿瘤生长早期无血管形成，随着瘤体的增大，肿瘤内出现微小的新生血管，肿瘤将进一步获得增殖的能力，并具有侵袭、转移的潜能，组织内血管新生的程度与肿瘤的生长、侵袭和转移有密切关系。此外，肿瘤血管不同于正常血管，血管内皮细胞形态异常、间距增大，肿瘤组织的微血管密度不仅可以定量反应肿瘤血管生长情况，还能预测肿瘤生长、转移和复发趋势。CD31作为血管内皮细胞标记物，可通过标记CD31蛋白精确定位肿瘤血管。因此，血管内皮标志CD31在肿瘤生长和转移中作用的深入研究，可以为肿瘤的治疗和预测提供帮助。

免疫组织化学(IHC)是通过抗体与所识别的组织或细胞中的抗原成分的特异性结合，利用化学反应使标记于抗体上的示踪剂(如荧光素、酶、生物素、重金属离子等)显色，对组织切片或细胞薄片上的抗原(多肽及蛋白质)进行定性、定位的染色技术。近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的成功研发，更主要的是对肿瘤分子机制认识的不断深入，免疫组化在肿瘤的分子诊断与鉴别中的应用价值受到了普遍的认可。

在免疫组化中，CD31是主要用于证明内皮细胞组织的存在，用于评估肿瘤血管生成，反应肿瘤生长的程度。主要用于良恶性血管源性肿瘤的诊断和鉴别诊断，亦可用于各种肿瘤间质中血管生成的研究。目前抗肿瘤血管生成治疗已成为肿瘤治疗的常用方法，检测肿瘤血管生长情况也备受关注。目前国内外CD31抗体多以多克隆抗体为主，单克隆抗体制备成本高，稳定性较差，因此，获得稳定、特异性强、活性高的用于免疫组化检测的CD31单克隆抗体对于临床诊断和科学研究有重要意义。

发明内容

本发明针对上述问题，目的在于提供一种可产生CD31单克隆抗体的杂交瘤细胞株，CD31单克隆抗体，以及该抗体的制备方法和应用。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明实施例公开了一株可产生CD31单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其于2018年3月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201822。

另一方面，本发明的实施例还公开了一种CD31单克隆抗体的制备方法，其包括：

步骤(1)采用真核表达的CD31重组胞外区蛋白作为免疫原免疫动物体；

具体地，可采用胞外重组CD31蛋白作为免疫原，所述重组CD31蛋白为人工程细胞表达的CD31蛋白。对Balb/c小鼠进行首次免疫、第二次免疫、第三次免疫和加强免疫，其中首次免疫将CD31蛋白与等体积的弗氏完全佐剂乳化混合做免疫原，第二次免疫和第三次免疫将CD31蛋白与等体积的弗氏不完全佐剂乳化混合做免疫原，所述加强免疫将CD31蛋白作为免疫原，各免疫原的量和注射体积均不发生改变。