[发明专利]半胱氨酸改造的抗体-毒素偶联物

说明书

将目标抗体的重链235位丝氨酸(S)改造为半胱氨酸(C)，并通过此改造后的半胱氨酸的游离巯基(‑SH)与偶联了小分子高活性细胞毒素(Payload)的mc‑vc‑PAB‑OH连接子进行定点偶联，形成均一性优良的半胱氨酸改造的抗体‑毒素偶联物，其毒素比抗体比例(DAR)为1.6‑2.0，此抗体‑毒素偶联物具有通式：1C6‑HC‑S235C‑mc‑vc‑PAB‑payload，同时，本发明还披露了此TDC药物的制备、纯化方法，在过表达EGFRwt的肿瘤的治疗应用。

技术领域

本发明涉及一种化合物及其制备方法和用途，特别涉及一类半胱氨酸改造的抗体-毒素偶联物(TDC)及其制备方法和用途。

背景技术

表皮生长因子受体EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)是一种糖蛋白，属于ErbB受体家族的一种，该家族包括EGFR(ErbB-1),HER2/c-neu(ErbB-2),Her 3(ErbB-3)和Her 4(ErbB-4)。EGFR是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号传导的受体，贯通细胞膜，分子量170KDa，靠与配体结合来激活。激活后，EGFR由单体转化为二聚体。EGFR还可能和ErbB受体家族的其他成员聚合来激活，例如ErbB2/Her2/neu。

EGFR通常低量表达于多种正常组织细胞，包括皮肤、肝脏等，与正常生理作用相关。

EGFR过表达与多种肿瘤的发生与发展相关，包括头颈癌、膀胱癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、脑胶质瘤、肾癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌(Atalay et al.,2003；Herbst and Shin,2002)。

抗体-毒素偶联物(Antibody drug conjugate,ADC)是靶向治疗的热点领域，已在美国获批上市的两个药物Adcetris和Kadcyla表现出良好的临床疗效，并且有超过50个ADC药物在进行临床阶段研究。

发明内容

本发明的化合物半胱氨酸改造的抗体-毒素偶联物(TDC)具有通式：1C6-HC-S252C-mc-vc-PAB-payload。其中1C6是亲本抗体1A5重链252位(kabat编码)丝氨酸(S)改造为半胱氨酸(C)后的抗体。1C6的重链氨基酸序列为SEQ ID NO:12，1C6的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7。1C6的亲本抗体1A5重链氨基酸序列为SEQ ID NO:14，1A5的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:7。1C6保持了其亲本抗体1A5与抗原结合的能力(亲和力)，抗原为人的野生型表皮生长因子受体(EGFRwt)。1C6通过其重链252(kabat编码)位改造的半胱氨酸巯基与mc-vc-PAB-payload进行抗体-毒素偶联物(TDC)定点偶联，毒素比抗体比例DAR为1.6-2.0。本发明的化合物半胱氨酸改造的抗体-毒素偶联物(TDC)药物主要用于治疗过表达EGFRwt的肿瘤，包括头颈癌、结直肠癌、脑胶质癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、结直肠癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌等。

附图说明

图1为实施例25实验结果图；

图2-4、14、15为实施例28实验结果图；

图5、6为实施例29实验结果图；

图7为实施例30实验结果图；

图8-11为实施例26实验结果图；

图12、13为实施例27实验结果图。

具体实施方式

本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。

实施例1 mc的合成