[发明专利]一种小型动物切削冷冻包埋方法

权利要求书

1.一种小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备灌注插管；

S2、配制血管造影剂与包埋剂；

S3、根据动物样本的体型制作包埋盒；

S4、准备与配制麻醉剂以及配制脱毛剂；

S5、利用所述麻醉剂对动物样本进行麻醉；

S6、利用所述灌注插管对动物样本进行血管灌注；

S7、利用脱毛剂对动物样本进行脱毛处理；

S8、将脱毛后的动物样本放在盖有纱布的托盘上，按照动物样本的生活特征常规将动物样本卧姿摆放后，将装载有该动物样本的托盘移入冷柜中进行低温冷冻后，作固定包埋；

S9、将所述包埋盒放入冷柜中，加入所述包埋剂至包埋盒中，并覆盖所述包埋盒的底部，然后关上冷柜进行冷冻处理，待所述包埋盒冻结成平滑的底层后，将上述冷冻好的动物样本放入到所述包埋盒里，并保持动物样本身体长轴方向垂直于底层，再加入所述包埋剂至覆盖动物样本后进行冷冻，使动物样本固定在所述包埋盒里；

S10、冷冻包埋后的动物样本经过不同断层间距切削成若干断层切片。

2.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S1中：按照实验动物样本的大小及解剖结构特征，购买各种型号注射用的一次性注射针头和静脉针，将所述注射针头的针栓剪除，留下针梗部，用细砂纸将所述注射针头磨平磨光，剪去所述静脉针的针头，用塑料软管部接上所述注塑针头，细线结扎固定，完成灌注插管的制备。

3.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述步骤S2中，所述血管造影剂的配制过程包括如下步骤：根据动物样本大小，按比例配制出浓度为8％～20％明胶溶液，然后加人氧化铝或朱砂，充分拌匀后待用，并使明胶溶液的温度保持在35℃～45℃之间；

所述包埋剂的配制过程包括如下步骤：按3％～5％的浓度称取适量明胶，溶解过滤明胶，然后加入亚甲基蓝试剂1g/1000ml，搅拌均匀，配成所述包埋剂。

4.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述步骤S3中：按照实验要求确定卧式切削，测量动物样本的长宽高，选用有机玻璃为制作原材料；按照比例制作出一底座和五面可拆卸的有机玻璃活动板，经螺丝组装固定成呈长方型的盒子，在盒子内沿长度方向设置四个均匀分布的定位杆，以形成所述包埋盒。

5.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S4中，准备的麻醉剂为乙醚试剂，制备的麻醉剂为20g乌拉坦、5g水合氯醛晶体和100ml超纯净水混合制成混合麻醉液。

6.如权利要求5所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，当选用所述乙醚试剂对动物样本麻醉时，利用所述乙醚试剂对动物样本进行吸入麻醉，并将动物样本放入装有乙醚棉球的密封容器中，待麻醉后，取出仰卧固定于灌注平台上；当选用所述混合麻醉液对动物样本麻醉时，用注射器抽取混合麻醉液，随即对动物样本进行腹腔注射，待麻醉后将动物仰卧固定于灌注平台上，准备灌注。

7.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S4中，所述脱毛剂的配制包括如下两种溶液：(1)取6～10g硫化钠晶体，加入到装有100ml超纯净水的烧杯中，配制成浓度为6％～10％的硫化钠溶液；(2)取15～20g的氢氧化钠晶体，配制浓度为15％～20％的氢氧化钠溶液。

8.如权利要求1所述的小型动物切削冷冻包埋方法，其特征在于，在所述S6中，在动物样本麻醉后，于动物样本腹股沟部找到动脉搏动处，作1～2cm的矢状切口，钝性分离出股动脉和股静脉，按照血管大小，选择相适应的所述灌注插管，作动脉、静脉双向插管并结扎固定，然后注射肝素钠抗凝，待2～3分钟后放血处死，灌注相应的所述血管造影剂后，拔掉所述灌注插管，并结扎血管，防止所述血管造影剂渗漏，清理干净动物样本的切口及局部结构，作缝合处理。