[发明专利]一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法

说明书

本发明涉及一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法，属动物生物技术领域。以人成纤维细胞为研究对象，建立人成纤维细胞体外相容性评价方法，用此方法验证已报道的心脏或其他移植存活时间长的基因修饰猪成纤维细胞的结果，筛出更适合的补体调节因子、免疫应答因子及抗凝血因子，在GTKO的基础上，对上述因子组合后进行定点敲入或敲除，再对不同多因子组合的猪成纤维细胞用此方法进行早期筛选，获得3种以上最佳基因组合的细胞再克隆，克隆猪进行猪‑非灵长类的心脏移植验证此筛选方法的可靠性。本发明不需在获得基因组合修饰猪的基础上即可评价最佳基因组合，将极大地节约基因组合筛选时间和经费投入，对开发真正的异种移植供体猪具有重大的意义。

技术领域

本发明属于动物生物技术领域，具体地说，涉及一种筛选异种移植供体猪最佳基因组合的方法。

背景技术

器官移植作为治疗终末端器官衰竭患者的一种比较有效方法，在临床上得到了广泛应用。然而，这也使得人类器官供体缺乏的状况越来越严重。据美国器官获取和移植网络（Organ Procurement and Transplantation Network, OPTN，http://optn.transplant.hrsa.gov/data/）2016年8月11日公布的数据显示，美国本土有134559例的患者在等待供体，按器官类型来分，等待肾脏移植的患者最多，达109530例，其次为肝脏15840例，心脏4088例，肾/胰2066例，肺1670例，胰1084例，肠242例，心脏/肺39例；而公布的器官移植数据显示，2014年1-12月份开展的器官移植总数为29533例，其中来自死者的器官供体有23715例，来自活体的器官供体有5818例，而2014年1-12月份获得的器官供体总数为14412例，其中来自死者的器官供体有8594例，来自活体的器官供体有5818例。欧洲器官移植网站（Eurotransplant）发表的2016年度报告（Annual Report 2016, http://www.eurotransplant.org/）显示，在奥地利、比利时、克罗地亚、德国、匈牙利、卢森堡、荷兰、斯洛文尼亚共和国共8个国家，总人口13370万人中，2016年捐赠器官的死者有2001名，平均100万人口中有14.96名死者捐赠了器官，而等待器官移植的患者则有14533名，其中移植了7568例，有1329名患者因等不到器官移植而死亡。我国目前每年可以实施临床器官移植的数量约为1万例，而等待器官移植的病人则有150万，等待器官移植与可进行器官移植患者的数量比值为150:1。近年来，随着我国糖尿病、慢性肾病、心血管疾病以及肝炎等疾病患者的大幅增长，使得发展成为终末期肝、肾、心等器官衰竭的病人正在或将急剧增加，对器官移植需求的压力也将越来越大。而且，从2015年1月1日起，我国已经全面停止使用死囚器官作为移植供体来源，公民去世后自愿器官捐献将成为我国器官移植使用的最终来源，这势必导致器官供体本已日益短缺的形势更加严峻。器官移植获取组织（OPO）对我国现有的173家器官移植医院的统计，截至2016年12月31日，全国累计实现逝世后器官捐献9996例，捐献大器官26613个，其中2016年实现捐献4080例，每百万人口捐献率为2.98，按平均每例可捐献3个器官算，约有1.2万个逝后捐献器官可供移植，但过去一年加上亲体移植，全国也仅开展1.3万例移植手术，且其中大量是肝移植和肾移植，心肺移植较少；捐献器官11296个，比2015年度增加47.5%；各种渠道报名登记器官捐献志愿人数104538人，比2015年度增加三倍多。尽管器官捐献得到飞速发展，但对于全国等待供体的庞大患者群体来说，死者捐献的器官只是杯水车薪。因此，器官的严重短缺，最终将给病人、家庭、社会和国家带来沉重负担，已成为全球性的社会问题。寻找新的供体来源来解决目前器官短缺的难题刻不容缓。目前，异种器官移植被公认为解决全球人类器官供体严重不足的有效途径，更有甚者认为是唯一途径。