[发明专利]用于分离和富集细胞的分离液、试剂盒及其应用

说明书

一种用于分离和富集细胞的分离液、试剂盒及其应用，分离液包括分离介质、粘度调节剂、防腐剂和超纯水；试剂盒内含分离液；采用分离液的分离方法包含如下过程：S1:将一定量的分离液加入离心管；S2:将待分离样本缓慢加入S1步骤中的分离液上层；S3两步离心，第一次离心弃上层标本，第二次离心弃分离液，最后管底的细胞沉淀即为富集的较单一细胞。本发明可操作性强、稳定性好、可靠性高，适用于医院大规模的病理细胞标本的分离、提纯，具有较高的市场推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于分离和富集细胞的分离液、试剂盒及其应用。

背景技术

20世纪90年代末以来，液基薄层制片技术已逐步取代了传统的手工涂片及刮片，液基取材方法更科学、简便，镜下制片效果亦大大优于传统涂片，整体提升了细胞制片效果，进而使细胞学诊断阳性率和准确性有了大幅提高。然而因炎细胞、粘液、血液细胞碎片影响而产生的背景脏乱却成为其美中不足；它严重影响制片质量，干扰病理医师诊断。我们尝试用细胞分离液及梯度分离方法来去除无诊断意义的成分，不但有利于镜下观察,而且更有利于诊断。

同时，现有的细胞分离液均存在着操作复杂、加样速度缓慢、不利于规模化、加样技术难掌握、操作者易抵触等缺点，极大地影响了后续推广应用工作。在分离细胞时，需极其缓慢的加入细胞样本，以防止细胞分离液液面的破坏，如果细胞悬液与分离液混合，那么细胞分离效果将大打折扣。这个过程已严重制约了大规模细胞分离的进行，成为处理样本的瓶颈。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于分离和富集细胞的分离液、试剂盒及其应用，防止过多的炎性细胞、细胞碎片等杂质干扰病理医师的诊断，克服实际工作中经常遇到炎细胞过多，背景不干净导致无法诊断的缺点。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种用于分离和富集细胞的分离液，其特征在于，包括，所述的分离液包括分离介质、粘度调节剂、防腐剂和超纯水。

进一步的，所述的分离液中各组分质量占比：分离介质1％-10％，粘度调节剂1％-10％，防腐剂0.1％-5％，超纯水补足所需克重。

进一步的，其特征在于，所述的分离介质采用蔗糖、聚蔗糖或者Percoll(硅石胶态悬浮液)。

进一步的，其特征在于，所述的粘度调节剂采用泛影葡胺、泛影酸钠和羧甲基纤维素钠中的两种组合。

进一步的，所述的粘度调节剂中两种组合的配比在1：5-7。

进一步的，其特征在于，所述的防腐剂采用苯酚、苯甲酸、山梨酸钾或者尼泊金甲酯。

一种用于分离和富集细胞的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有上述分离液。

一种分离和富集细胞的方法，其特征在于，所述的方法中采用上述的分离液或者采用上述的试剂盒。

进一步的，一种分离和富集细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将分离液加入离心管；

S2：将待分离样本缓慢加入S1中的分离液上层；

S3：第一次离心，离心后吸弃上层标本；进入第二次离心，离心后倒弃剩余分离液，管底的细胞沉淀即为富集的单一细胞；

S4：S3中的细胞沉淀通过液基细胞学制片。

进一步的，所述的S4中的液基细胞学制片采用沉降制片法或者滴片法。

进一步的，所述的沉降制片法包括以下步骤：

S11:S3中的细胞沉淀用缓冲液稀释，用振荡器混匀细胞团；

S12:细胞稀释液转移至沉降制片机上，自动制片，染色。

进一步的，所述的滴片法包括以下步骤：