[发明专利]用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法

权利要求书

1.用于刑侦目的生物体液中咪唑啉类药物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)生物体液预处理；生物体液为全血或尿液；咪唑啉类药物为四氢唑啉、赛洛唑啉、萘甲唑啉、安他唑啉和羟甲唑啉；

生物体液预处理采用如下方法之一：液-液萃取法或HLB柱固相萃取方法；

所述液-液萃取法包括如下步骤：取生物体液1mL，用氢氧化钠溶液调pH＝10，5mL丙酮振荡提取，离心10min、转速为8000r/min，转移有机相至尖底玻璃试管中，再用5mL丙酮重复提取一次，合并有机相，50℃空气流下挥干，残渣用200μL甲醇溶解定容，过0.22μm的有机系微孔滤膜，滤液即为液-液萃取法预处理液，留待LC-MS/MS检测；

所述HLB柱固相萃取方法包括如下步骤：取生物体液1mL，加入1mL pH＝6的磷酸盐缓冲液，混旋1分钟，离心10min、转速8000r/min，后取上清液待过柱；柱活化：取HLB固相萃取柱，依次以2mL甲醇、2mL水活化；过柱：上清液过柱，流速1.0mL/min；淋洗：2mL甲醇-水淋洗，甲醇与水的体积比为5:95；洗脱：用1mL甲醇洗脱，收集洗脱液；挥干定容：50℃空气吹干仪上吹干，残留物用200μL甲醇溶解，过0.22μm的有机系微孔滤膜，所得物即为HLB柱固相萃取方法预处理液，留待LC-MS/MS检测；

(2)咪唑啉类药物的检测，使用液相色谱质谱LC-MS/MS检测咪唑啉类药物；质谱为ABSciex Qtrap 5500；

步骤(2)中，利用液相色谱质谱LC-MS/MS检测咪唑啉类药物时的液相色谱条件及质谱条件如下：

a)色谱柱：Aglient Zorbax Eclipse Plus C18或等效柱，规格：2.1mm×100mm，1.8μm；

b)流动相：A相：甲醇，B相：0.1％甲酸水溶液；0.1％甲酸水溶液是指100mL水中加入0.1mL甲酸配制而成；

c)洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件如下：

时间/min	流速/mL/min	A相/V％	B相/V％
0.2	0.4	30	70
3	0.4	70	30
3.8	0.4	70	30
4.0	0.4	30	70
5.5	0.4	30	70

d)柱温：35℃；

e)流速：0.4mL/min；

f)离子源：电喷雾电离源(ESI)；

g)检测方式：正离子；

h)扫描方式：多反应离子监测(MRM)；

i)雾化气、脱溶剂气：氮气；

j)碰撞气：氩气；

k)离子源温度：150℃；

l)雾化温度：500℃

m)毛细管电压：5.5kV；

n)定性、定量离子、去簇电压和碰撞能量条件如下：