[发明专利]一种利用纤维素固定化CBD-EndoS融合酶的方法有效
| 申请号： | 201810358946.3 | 申请日： | 2018-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN108623696B | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 吴志猛;周志昉;赵恺 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N11/12 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 纤维素 固定 cbd endos 融合 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种酶的固定化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)制备含有氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的双功能融合蛋白粗酶液；
(2)将Sigmacell Cellulose纤维素微球入KPB缓冲液预处理5～15min，离心弃上清，得到预处理后的纤维素微球；
(3)将步骤(2)制备得到的预处理后的纤维素微球、100mM NaCl添加至步骤(1)得到的粗酶液中，在pH 6.0，20℃条件下固定30min，制备得到固定化酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双功能融合蛋白的构建方法为，将编码糖苷内切酶的基因片段，定向克隆至含有纤维素结合域的pET系列载体，构建具有纤维素结合活性和糖苷内切活性的双功能融合蛋白CBD-EndoS的载体，并转入细胞中，培养细胞，收集细胞产生的双功能融合蛋白。
3.应用权利要求1或2所述方法制备的固定化酶。
4.权利要求3所述的固定化酶在食品、生物、医药、化工领域中的应用。
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