[发明专利]一种基于二碳化三钛二维金属碳化物催化鲁米诺电化学发光探针的生物传感器及制备方法

权利要求书

1.一种基于二碳化三钛二维金属碳化物催化鲁米诺电化学发光探针，其特征是，包括纳米片Ti3C2MXenes、连接分子聚乙烯亚胺和生物识别分子1，所述纳米片Ti3C2MXenes与连接分子通过静电吸附连接，所述连接分子与生物识别分子1通过酰胺基团连接，所述连接分子含有伯胺基团或仲胺基团，且所述连接分子溶于水后能够带有正电荷，所述生物识别分子1为5’端带有羧基的单链DNA序列1；所述单链DNA序列1由5’至3’的序列为TTTTTT CACCCC CAC CTC GCT CCC GTG ACA CTA ATG CTA，能够识别外泌体上的CD63蛋白质。

2.一种权利要求1所述的探针的制备方法，其特征是，将连接分子与纳米片Ti3C2MXenes置于水中混合均匀后，搅拌一段时间离心获得沉淀，将获得的沉淀与生物识别分子1进行酰胺反应即可获得；搅拌时间为1～1.5h；离心分离的转速超过10000rpm；所述酰胺反应的反应体系为1-(3-(二甲基氨基)丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺钠盐。

3.一种与权利要求1所述的探针配合使用的生物传感器电极，其特征是，玻碳电极表面通过金纳米颗粒修饰，金纳米颗粒与至少含有两个氨基的分子中的一个氨基通过酰胺基团进行连接，至少含有两个氨基的分子中的另一个氨基与羧基封端的聚N-异丙基丙烯酰胺中的一个羧基通过酰胺基团使羧基封端的聚N-异丙基丙烯酰胺与至少含有两个氨基的分子进行连接，羧基封端的聚N-异丙基丙烯酰胺中的另一个羧基与生物识别分子2通过酰胺基团使羧基封端的聚N-异丙基丙烯酰胺与生物识别分子2进行连接，其中，生物识别分子2为5’端带有氨基的单链DNA序列2，所述单链DNA序列2能够识别外泌体上的EpCAM蛋白质；至少含有两个氨基的分子为乙二胺；所述羧基封端的聚N-异丙基丙烯酰胺的数均分子量为1000～5000；所述单链DNA序列2由5’至3’的序列为TTTTTT CAC TAC AGA GGT TGC GTC TGT CCCACG TTG TCA TGG GGG GTT GGC CTG。

4.一种权利要求3所述的生物传感器电极的制备方法，其特征是，将金纳米颗粒分散液滴加至玻碳电极表面使金纳米颗粒附着在玻碳电极表面，通过酰胺反应将至少含有两个氨基的分子连接至金纳米颗粒，再通过酰胺反应使羧基封端的聚N-异丙基丙烯酰胺与至少含有两个氨基的分子连接，然后通过酰胺反应使生物识别分子2与羧基封端的聚N-异丙基丙烯酰胺连接；制备方法中的涉及的反应温度、处理温度为室温或者37±0.5℃。

5.一种电致化学发光的生物传感器，其特征是，包括权利要求1所述的探针和权利要求3所述的生物传感器电极。

6.一种电致化学发光的试剂盒，其特征是，包括权利要求1所述的探针、权利要求3所述的生物传感器电极及鲁米诺。

7.一种权利要求1所述的探针、权利要求3所述的生物传感器电极、权利要求5所述的生物传感器或权利要求6所述的试剂盒在电致化学发光检测外泌体中的应用。

8.一种电致化学发光检测外泌体的方法，其特征是，将权利要求3所述的生物传感器电极浸没至待测外泌体溶液中，使外泌体附着在生物传感器电极上，然后将附着外泌体生物传感器电极浸没至权利要求1所述探针的溶液中，使探针附着在生物传感器电极的外泌体上，从而组成探针和生物传感器电极夹载外泌体的生物传感器，对探针和生物传感器电极夹载外泌体的生物传感器进行电化学发光检测即可。