[发明专利]一种肿瘤靶向性促凋亡融合蛋白及其用途

说明书

本发明提供了一种肿瘤靶向性促凋亡融合蛋白，它由TRAIL片段及肿瘤导向肽RGR连接而成。本发明还提供了该融合蛋白的制备方法和用途。本发明融合蛋白可以显著增强TRAIL片段的抗肿瘤活性，在体内外均对多种肿瘤模型表现出强大的杀伤甚至清除能力，可作为高效的潜在广谱抗肿瘤药物，临床应用前景良好。

技术领域

本发明属于肿瘤治疗技术领域，具体涉及一种肿瘤靶向性促凋亡融合蛋白及其用途。

背景技术

癌症是致人类死亡的主要疾病之一，据WHO统计2015年全球约880万癌症相关死亡病例。目前，临床上治疗癌症主要依赖手术切除、放疗和化疗三种传统方法，存在着手术会造成创伤及并发症，放化疗具有毒副作用影响患者生活质量等缺点。肿瘤治疗的理想目标是药物能高效进入肿瘤组织杀伤肿瘤细胞但对正常细胞无损伤，避免给机体带来毒副作用(Yap et al.,Nat Rev Cancer 2009,9(3):167-81；Gotwals et al.,Nat Rev Cancer2017,17(5):286-301)。

TRAIL(TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL)即Apo-2L，是肿瘤坏死因子超家族成员之一，是一种Ⅱ型跨膜糖蛋白，研究表明TRAIL主要通过两条不同的信号通路调控细胞凋亡，即死亡受体介导的外源性凋亡途径和线粒体介导的内源性凋亡途径。正常细胞则可通过上调诱骗受体等多种机制逃逸TRAIL诱导的凋亡反应。因此，TRAIL能选择性的诱导肿瘤细胞凋亡而对机体正常组织无明显损伤。目前，通过基因工程重组的胞外段(114-281aa)可溶性TRAIL(Soluble TRAIL，sTRAIL)作为抗肿瘤药物已进入临床试验II期。

然而，重组sTRAIL在体内的抗肿瘤效果远不及其体外作用效果。由于sTRAIL受体分布广泛，与正常细胞诱骗受体的结合可能会阻碍sTRAIL向肿瘤组织富集和活性的发挥。更为重要的是，肿瘤细胞常常表现出对sTRAIL的抗性，使得sTRAIL凋亡诱导能力不足(Dimberg et al.,Oncogene 2013,32(11):1341-50；de Miguel et al.,Cell DeathDiffer 2016,23(5):733-47)。通过改进sTRAIL蛋白，有望提高其对肿瘤的靶向性并增强对肿瘤细胞的凋亡诱导能力。

肿瘤导向肽是一类能够特异识别并结合肿瘤组织的小分子肽，可作为肿瘤靶向载体。公开号为EP 2567983 A1的专利申请报道了一种由肿瘤导向肽NGR与sTRAIL连接的重组多肽，其仅在一定程度上提高了sTRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种对肿瘤细胞具有良好杀伤作用的肿瘤靶向性促凋亡融合蛋白及其用途。

本发明提供了一种肿瘤靶向性促凋亡融合蛋白，它由TRAIL片段及肿瘤导向肽RGR连接而成，其中肿瘤导向肽RGR的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：CRGRRST

其中，所述TRAIL片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：

VRERGPQRVAAHITGTRGRSNTLSSPNSKNEKALGRKINSWESSRSGHSFLSNLHLRNGELVIHEKGFYYIYSQTYFRFQEEIKENTKNDKQMVQYIYKYTSYPDPILLMKSARNSCWSKDAEYGLYSIYQGGIFELKENDRIFVSVTNEHLIDMDHEASFFGAFLVG

其中，它还包含连接肽；优选地，连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

SEQ ID NO.3：GGGGSGGGGSGGGGS

其中，所述肿瘤导向肽RGR连接在TRAIL片段的N端。