[发明专利]一种锰离子结合肽及其筛选方法、亲和性能的检测方法

说明书

本发明属于环保领域，具体涉及锰离子结合肽，与锰离子有高度的亲和力，应用于环境金属污染中锰离子的生物修复。本发明提供锰离子结合肽的筛选方法，利用噬菌体肽库展示筛选出与锰离子特异性结合最强的肽；以噬菌体随机十二肽库为基础，利用含四环素的LB培养基筛选出具有四环素抗性的大肠杆菌ER2738作为噬菌体的宿主细胞，通过去除Ni²⁺的Ni‑NTAagarose树脂的淘洗，能够筛选出对锰离子专一亲和力的噬菌体多肽。本发明提供锰离子结合肽亲和性能的检测方法，通过酶联免疫法，测定快速准确的比较不同噬菌体多肽对锰离子的亲和能力,且通过这种方法将锰离子结合肽快速的应用于环境锰污染的治理。

技术领域

本发明属于环保领域，具体涉及一种锰离子结合肽及其筛选方法、亲和性能的检测方法。

背景技术

锰离子结合肽是一种金属结合肽，在现代科技中金属结合肽应用于环境的重金属污染治理，由于其效果明显、效率高、成本低，逐渐取代物理修复和化学修复，成为当前治理环境重金属污染不可或缺的途径之一。金属离子结合肽是通过与环境中的金属离子以化学作用形成复合物从而降低，富集或者消除金属离子对生物细胞的毒性。

锰污染是指锰对环境的污染，空气中超过500微克/立方米可造成锰中毒，水中二价锰对人、畜和水生生物的毒性很小，地表水一般为8微克/立方米，土壤中锰含量平均值为1000ppm。而锰污染通过锰离子结合肽的方式治理的方式，还未实现。如何获得高亲和力的锰离子结合肽(结合分子)以及得到与特殊靶分子高效结合的肽类配体，是本领域人员亟须解决的问题。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种锰离子结合肽，这种锰离子结合肽与锰离子有高度的亲和力，应用于环境金属污染中锰离子的生物修复。

本发明的另一个目的是提供一种锰离子结合肽的筛选方法，利用噬菌体肽库展示筛选出与锰离子特异性结合最强的肽；以噬菌体随机十二肽库为基础，利用含四环素的LB培养基筛选出具有四环素抗性的大肠杆菌ER2738作为噬菌体的宿主细胞，通过去除Ni²⁺的Ni-NTAagarose树脂的淘洗，能够筛选出对锰离子专一亲和的噬菌体多肽。

本发明的再一个目的是提供一种锰离子结合肽亲和性能的检测方法，通过酶联免疫法比较不同噬菌体多肽对锰离子的亲和能力，高效、快速方便。

本发明技术方案如下：

本发明提供一种锰离子结合肽，其序列中包括有DXXD、HXHH或PXXP，所述X代表任何氨基酸。

本发明优选的技术方案中，锰离子结合肽，包括如下序列多肽的一种或者两种以上的组合；

SEQIDNO.1:DYHDPSRLRCGR、

SEQIDNO.2:DYHDPSRLRWGR、

SEQIDNO.3:DHHDPSQHTLRK、

SEQIDNO.4:DYHDPSPPTLRK、

SEQIDNO.5:DYHDPSLPTLRK、

SEQIDNO.6:LESMITQSNRIN、

SEQIDNO.7:GNNPLHVHHDKR、

SEQIDNO.8:GHGPHRFDKWIQ、

SEQIDNO.9:ADTVDSCLANSH、

SEQIDNO.10:DYHDPSSPTLRK。