[发明专利]嗜热子囊菌基因表达系统有效
申请号: | 201810354443.9 | 申请日: | 2018-04-19 |
公开(公告)号: | CN108949579B | 公开(公告)日: | 2021-10-01 |
发明(设计)人: | 洪泂;胡圣霖;王冬梅 | 申请(专利权)人: | 中国科学技术大学 |
主分类号: | C12N1/14 | 分类号: | C12N1/14;C12N1/15;C12N15/80;C12R1/645 |
代理公司: | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人: | 高丽娜 |
地址: | 230026 安*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 子囊 基因 表达 系统 | ||
1.一种嗜热子囊菌乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶基因(pyrG)缺陷型菌株,其保藏号为CGMCC.13375。
2.一种嗜热子囊菌基因表达系统,所述表达系统包含权利要求1的菌株作为宿主菌。
3.权利要求2的表达系统,所述表达系统还包含用于转化所述宿主菌的载有目的基因的载体。
4.权利要求3的表达系统,其中所述载体是质粒。
5.权利要求3或4的表达系统,其中所述载体包含与权利要求1的pyrG缺陷型菌株对应的pyrG基因作为转化的选择标签。
6.权利要求5的表达系统,其中所述pyrG基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
7.权利要求3的表达系统,其中所述载体在所述目的基因上游还包含启动子,所述启动子为纤维二糖水解酶(CBH)或内切葡萄糖苷酶(EG)的启动子。
8.权利要求7的表达系统,其中CBH启动子的核酸序列如SEQ IDNO.3所示,EG启动子的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
9.一种分离的核酸,所述核酸编码嗜热子囊菌乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶,所述核酸的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
10.一种用载有目的基因的外源核酸载体转化权利要求1的菌株的方法,所述方法包括以下步骤:
用蜗牛酶处理所述菌株的菌丝以制备具有再生活力的原生质体;
向获得的原生质体加入所述外源核酸载体并孵育;以及
在加入所述外源核酸载体并孵育后,加入PEG溶液并孵育。
11.权利要求10所述的方法,其中所述PEG溶液是PEG4000溶液。
12.一种利用权利要求1的菌株作为宿主菌表达目的基因的方法,所述方法包括:
通过权利要求10或11的方法将目的基因转化到所述宿主菌中;以及
对转化到所述宿主菌中的所述目的基因进行诱导表达。
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