[发明专利]一种γ-L-谷氨酰正丙胺的酶法转化制备方法

说明书

本发明提供了一种γ‑L‑谷氨酰正丙胺的酶法转化制备方法，包括如下步骤：(1)将具有γ‑谷氨酰转肽酶活性的菌株在培养基中培养发酵，发酵液离心后得含γ‑谷氨酰转肽酶的湿菌体；(2)将湿菌体中加入转化液，并于35‑50℃，pH 6‑11条件下酶促反应，等电点结晶法分离得γ‑L‑谷氨酰正丙胺；转换液包括L‑谷氨酸‑γ‑甲酯、正丙胺，以及乙酸乙酯、乙酸丁酯、辛醇、正己醇中的一种。本发明采用γ‑谷氨酰转肽酶的特定菌株于培养基中培养，高效表达γ‑谷氨酰转肽酶，使酶法合成γ‑L‑谷氨酰正丙胺有较高的催化速率和转化率；并且，反应条件温和、酶立体选择性强、催化效率高、成本低、工艺流程简单，适合工业化生产。

技术领域

本发明涉及γ-L-谷氨酰正丙胺的制备领域，尤其涉及一种γ-L-谷氨酰正丙胺的酶法转化制备方法。

背景技术

γ-L-谷氨酰正丙胺是一种重要的γ-谷氨酰烷基胺，γ-谷氨酰烷基胺具有重要的生理活性。γ-L-谷氨酰正丙胺可用于医药领域，具有非常广泛的应用前景。

γ-谷氨酰转肽酶(EC 2.3.2.2)作为一种重要的酶参与谷氨酰循环反应，它能特异性地催化谷氨酰基团的迁移过程，从而获得含有谷氨酰基团化合物。目前为止，利用γ-谷氨酰转肽酶催化合成γ-D-谷氨酰-L-色氨酸、谷胱甘肽、茶氨酸、γ-谷氨酰-牛磺酸等化合物的报道很多，但却尚未有利用该酶制备γ-L-谷氨酰正丙胺的报道。

据此，目前急需一种利用γ-谷氨酰转肽酶制备γ-L-谷氨酰正丙胺的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种以γ-谷氨酰转肽酶为酶源的γ-L-谷氨酰正丙胺的酶法转化制备方法。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种γ-L-谷氨酰正丙胺的酶法转化制备方法，包括如下步骤：

(1)将具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株在培养基中培养发酵，发酵液离心后得到含γ-谷氨酰转肽酶的湿菌体；

(2)将上述湿菌体中加入转化液，并于35-50℃，pH 6-11条件下进行酶促反应，等电点结晶法分离后得到γ-L-谷氨酰正丙胺；其中，转换液具体包括L-谷氨酸-γ-甲酯、正丙胺，以及乙酸乙酯、乙酸丁酯、辛醇、正己醇中的一种。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中，具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株选自枯草芽孢杆菌CGMCC NO:1.1628、大肠杆菌ATCC15489、施氏假单胞菌CGMCC NO:1.202以及铜绿假单胞菌CGMCC NO：1.1129中的一种。

作为本发明的优选方式之一，所述枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、施氏假单胞菌和铜绿假单胞菌均直接购自国内外市场。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中，培养基成分包括：10-45g/L碳源物质、5-40g/L氮源物质、1.5g/L柠檬酸、2.0g/L硫酸铵、4.0g/L K₂HPO₄、2.0g/L MgSO₄、0.05g/L CaCl₂、0.001g/L CoCl₂和0.0002g/L MnC₄H₆O₄·4H₂O。

作为本发明的优选方式之一，所述碳源物质具体采用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖中的一种或多种。

作为本发明的优选方式之一，所述氮源物质具体采用牛肉膏、酵母膏、玉米浆、蛋白胨、豆饼水解液中的一种或多种。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中，L-谷氨酸-γ-甲酯的浓度为5-80g/L。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中，正丙胺的浓度为10-120g/L。