[发明专利]转基因水稻PA110-15品系特异性的LAMP检测方法

说明书

本发明公开了一种转基因水稻PA110‑15品系特异性的LAMP检测方法，包括以下步骤：A、设计合成引物；B、配置LAMP反应体系；C、将待检测转基因水稻PA110‑15的DNA稀释液加入反应体系中，进行LAMP反应，所得扩增产物进行凝胶电泳即可。本发明的方法具有快速、高效、灵敏、准确、方便等优点，满足田间实时快速和日常实验室准确监测转基因水稻PA110‑15的要求。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及转基因植物品系的检测方法，具体涉及LAMP检测转基因水稻PA110-15品系特异性的引物和方法，尤其涉及一种转基因水稻PA110-15品系特异性的LAMP检测方法。

背景技术

随着农业转基因生物技术的快速发展，全球转基因作物的种植面积迅猛增加。截至2016年，有26个国家种植了1.815亿公顷的转基因作物。我国一直大力投入转基因作物研发，目前转基因棉花和转基因番木瓜已商业化，转植酸酶玉米和转基因抗虫水稻也获得了安全证书，一大批转基因作物正处于申报安全证书的评价过程中。转基因作物在解决粮食危机的同时，也带来了人们对食品安全和环境安全的担忧。许多国家和地区纷纷开始实施转基因标签制度，对转基因产品实施限量标识和进口，目前国际上对于转基因标识管理主要分为4类：一是自愿标识，如美国对转基因食品标识与否和如何标识联邦均不作强制性规定(致敏性除外)；二是定量全面强制标识，即对所有产品只要其转基因成分含量超过阈值就必须标识，如欧盟规定转基因成分超过0.9％、巴西规定转基因成分超过1％必须标识；三是定量部分强制性标识，即对特定类别产品只要其转基因成分含量超过阈值就必须标识，如日本规定对豆腐、玉米小食品、纳豆等24种由大豆或玉米制成的食品进行转基因标识，设定阈值为5％；四是定性按目录强制标识，即凡是列入目录的产品，只要含有转基因成分或者是由转基因作物加工而成的，必须标识。我国属于第四种。我国政府高度重视转基因生物的安全管理，颁布实施了《农业转基因生物安全管理条例》及其配套管理办法，且采用强制性标识方法，只要含有转基因成分就必须标识。因此建立高效、准确的转基因成分的检测方法是转基因生物安全监管得以顺利开展和实施的关键。

常用的转基因作物检测方法有定性PCR、复合PCR、实时荧光定量PCR、试纸条等。但在检测速度、成本、操作性上都具有不同程度上的缺陷。环状等温扩增技术是2000年由日本科学家Notomi等建立的一种新型核酸等温扩增技术，具有简便、高效、特异、快速等优点，虽然目前已广泛应用与病原微生物和转基因作物的分子检测中，但在转基因特异品系检测上的应用研究还很少。

PA110-15是以两系温敏不育系培矮64S(PA64S)为受体，通过农杆菌介导获得的转高赖氨酸储藏蛋白基因水稻，目前尚未获得我国农业部颁发的安全证书。目前已经很多关于PA110-15材料的检测方法。专利CN201410081539公开了转基因水稻PA110-15转化体特异性PCR检测引物及定性检测方法和试剂盒；专利CN201410081893公开了转基因水稻PA110-15外源插入片段旁侧序列及应用；专利CN201510685106公开了转基因水稻PA110-15品系特异性5’端定量PCR检测引物；专利201510685126公开了转基因水稻PA110-15转化体特异性定量PCR检测引物；专利201510685232公开了转基因水稻PA110-15外源基因纯合杂合状态的PCR检测引物。这些研究全部采用普通PCR法和荧光PCR法，目前尚未发现将LAMP应用于转基因水稻PA110-15品系特异性检测的引物和方法。

因此有必要建立一种新型LAMP法对转基因水稻PA110-15品系特异性的检测技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，针对现有技术不足，提供一种转基因水稻PA110-15品系特异性的LAMP检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种转基因水稻PA110-15品系特异性的LAMP检测方法，包括以下步骤：

A、设计合成引物；