[发明专利]一种区分黑龙江三角鲂与南方鲂属鱼类的分子标记、试剂盒及区分方法

权利要求书

1.一种区分黑龙江三角鲂与南方鲂属鱼类的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括分子标记引物对HLJFLf1和HLJFLr1，具体序列为：

HLJFLf1：5'- GCATCTGGCTTCAATCTCA- 3'

HLJFLr1：5'-GATTTGCTGAGCGTAGGG- 3'；

该试剂盒还包括10×Taq Buffer、MgCl₂、dNTPs、TaqDNA 聚合酶、RE缓冲液10×Buffer、牛血清白蛋白BSA和TaqI内切酶。

2.权利要求1所述试剂盒在区分黑龙江三角鲂与南方鲂属鱼类中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于权利要求1所述试剂盒用于区分黑龙江三角鲂与南方鲂属鱼类，具体方法为：

一、提取待测鲂属鱼类鳍条的基因组DNA，备用；

二、以提取的基因组DNA为模板，以HLJFLf1和HLJFLr1为引物进行PCR扩增，获得PCR产物；

三、利用限制性内切酶TaqI对PCR产物进行酶切；

四、用1.5%的琼脂糖凝胶对酶切产物进行电泳检测，电泳结果为200bp和180bp双条带的对应个体为黑龙江三角鲂，否则对应个体非黑龙江三角鲂，即完成区分鉴定；

其中HLJFLf1核苷酸序列为：5'- GCATCTGGCTTCAATCTCA- 3'

HLJFLr1核苷酸序列为：5'-GATTTGCTGAGCGTAGGG- 3'。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于步骤二中PCR扩增的反应体系如下：

PCR扩增条件：94℃变性5min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环；再72℃延伸5min，4℃保温。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于步骤三酶切的反应体系如下：

酶切条件：65℃水浴酶切2h。