[发明专利]一种生物样品中细胞微囊泡的分离方法

说明书

本发明提供了一种生物样品中细胞微囊泡的分离方法，属于生物分析领域。这种分离方法包括：将预处理后的生物样品与脂质颗粒混合孵育后，形成细胞微囊泡‑脂质颗粒的复合物或融合物；再将细胞微囊泡‑脂质颗粒的复合物或融合物从生物样品中分离。该方法使用脂质颗粒捕获细胞微囊泡，克服了现有的脂质探针捕获法在分离细胞微囊泡时脂质分子在生物样品溶液中分散性差、易组装的缺陷，有效提高了细胞微囊泡的分离效率和纯度。

技术领域

本发明涉及生物分析领域，具体而言，涉及一种生物样品中细胞微囊泡的分离方法。

背景技术

研究人员发现，在许多液体生物样品中均含有多种膜包被的微囊泡，这类微囊泡内包含信使RNAs和microRNA等核酸类物质以及多种蛋白质。以外泌体为例，研究证实，外泌体可作为信使，通过血液、尿液、乳液、唾液等途径介导细胞间的信号转导，其内携带各种蛋白、核酸，甚至全基因组的DNA，因而外泌体内容物通常可以反映细胞健康或者疾病的状态，并且对周围细胞产生的影响，其在一定程度上反映了肿瘤等疾病的相关信息。由此，有效分离此类细胞微囊泡具有重要意义。

目前，分离此类细胞微囊泡的方法主要有：1)超速离心法，这种方法需要采用昂贵的设备才能实现；2)聚合物沉淀法，其缺点在于所获得的杂蛋白过多，影响纯化过程；3)凝胶排阻法，其缺点在于分离效率低，产品纯度不高；4)脂质探针捕获法，该方法是使用偶联生物素的脂质分子与样品接触，脂质分子插入微囊泡的磷脂双分子层中，再用亲和素偶联的磁珠捕获生物素-脂质分子-微囊泡复合物。该方法的缺点是脂质分子在水溶液中分散性差，易自组装成脂质体。该方法的改进型是将脂质分子通过硅烷化修饰在玻璃基底上，缺点是硅烷化的效率有限，玻璃基底的表面积有限；5)正电膜捕获法，该方法是使用带正电的再生纤维素多孔膜、以及带正电的强阴离子交换树脂，捕获带负电的微囊泡，其缺点是纯度和分离效率有限。

由上述分析可知，现有技术中分离细胞微囊泡的技术都各有局限性，无法满足研究需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生物样品中细胞微囊泡的分离方法，旨在提高细胞微囊泡的分离效率和纯度。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种生物样品中细胞微囊泡的分离方法，其包括：

将预处理后的生物样品与脂质颗粒混合孵育后，形成细胞微囊泡-脂质颗粒的复合物或融合物；再将细胞微囊泡-脂质颗粒的复合物或融合物从生物样品中分离。

与现有技术相比，本发明的有益效果例如包括：

本发明提供的这种生物样品中细胞微囊泡的分离方法，通过对生物样品进行预处理，去除生物样品中的细胞、细胞碎片以及团聚物，得到包含有细胞微囊泡的生物样品上清液；再将该生物样品上清液与脂质颗粒混合孵育，在孵育过程中，由于脂质颗粒的表面具有亲脂性的基团或表面具有正电荷，其能够通过亲和作用与上清液中的细胞微囊泡结合、或者与上清液中的细胞微囊泡相融合，形成细胞微囊泡-脂质颗粒的复合物或融合物；由于这种细胞微囊泡-脂质颗粒的复合物或融合物的质量及分子大小均远大于细胞微囊泡，故可利用较为常规的分离技术，便可使细胞微囊泡-脂质颗粒的复合物或融合物与上清液分离，得到携带有细胞微囊泡的复合物或融合物；可进一步将其裂解，从中提取核酸或蛋白质，用于多种生物分析中。

该方法使用脂质颗粒捕获细胞微囊泡，克服了现有的脂质探针捕获法在分离细胞微囊泡时脂质分子在生物样品溶液中分散性差、易组装的缺陷，有效提高了细胞微囊泡的分离效率和纯度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为实施例1所得细胞外囊泡的蛋白与标准超速离心法所得的细胞外囊泡的蛋白，同时进行Western blot分析，得到的细胞外囊泡标志物含量的结果。