[发明专利]东北红豆杉组培苗生根方法

说明书

本发明公开了一种东北红豆杉组培苗生根方法，包括以下步骤：取东北红豆杉组培苗，无菌条件下用无菌水清洗后接种到一号培养基中培养一周，然后将组培苗转移到二号培养基；组培苗在二号培养基中培养一周后转移到三号培养基；组培苗在三号培养基中培养一周后转移到四号培养基；组培苗在四号培养基中培养两周后陆续生根。本发明先通过液体培养基振荡培养，促进组培苗中的生根抑制物质释放排出，然后再使用固体培养基静置培养，培养基中添加促进生根物质，使组培苗内激素平衡改变，促进生根的生长调节物质含量增加，不定根诱导被启动。生根时间短，生根率高，解决了东北红豆杉诱导生根困难的问题。

技术领域

本发明涉及植物组培领域，特别涉及一种东北红豆杉组培苗生根方法。

背景技术

东北红豆杉(Taxus cuspidata)属红豆杉科(Taxaceae)红豆杉属(Taxus) 常绿针叶乔木。东北红豆杉天然种群数量的稀少，被列为国家一级重点保护的野生珍稀濒危植物。

选择具有初生分生能力的红豆杉组织(嫩枝、顶芽、腋芽、茎尖、离体胚等)，经体外培养可直接诱导发芽或生根，可以形成完整植株。影响外植体芽诱导效率的因素主要有种属、取材季节、部位、培养基配比、外源激素浓度，常选用WPM、B5、MS、DCR等作基本培养基，为防止褐变，可添加0.2％-0.5％的活性炭粉(AC)。以枝条为外植体时，多选用处于生长旺盛期或长有营养芽的嫩枝，这样有利于茎芽的诱导增殖。激素配比对诱导结果影响较大，但遵循愈伤组织诱导及有利于生根。目前尚未见系统的诱导红豆杉外植体生根发芽最佳条件的报道，研究结果主要集中于芽的诱导，如用TIBA(2，3，5-三碘苯甲酸) 诱导南方红豆杉新梢，3.0mg/L时诱导率可达100％，另外单独添加0.1mg/LZT 和0.01mg/L6-BA时效果也十分理想；而关于红豆杉外植体诱导生根方面的研究则不如芽诱导那么丰富，当前技术只能保证可以诱导出不定根，如喜马拉雅红豆杉的枝条在添加3.5mg/LIBA的MS和8mg/LIBA的1/2MS培养基上培养， 60-80d后可诱导生根。总的来说，分裂素浓度控制在1-4mg/L利于出芽，而生根则受外植体树龄和IBA影响较大，且诱导生根困难。红豆杉组培苗的生根还有待进一步研究。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种东北红豆杉组培苗生根方法。所述技术方案如下：

一方面，一种东北红豆杉组培苗生根方法，包括以下步骤：取东北红豆杉组培苗，无菌条件下用无菌水清洗后接种到一号培养基中培养一周，然后将组培苗转移到二号培养基；组培苗在二号培养基中培养一周后转移到三号培养基；组培苗在三号培养基中培养一周后转移到四号培养基；组培苗在四号培养基中培养两周后陆续生根；

一号培养基包括：无菌水和0.1mg/L IBA(吲哚丁酸)；

二号培养基包括：不含琼脂的1/4MS培养基和0.1mg/LIBA；

三号培养基包括：不含琼脂的1/4MS培养基和0.2mg/LIBA；

四号培养基包括：含琼脂的1/4MS培养基、0.2mg/LIBA、2％蔗糖和活性炭粉末5g/L。

进一步的，一号培养基、二号培养基、三号培养基和四号培养基pH值均为 5.8。

进一步的，一号培养基、二号培养基和三号培养基均置于振荡培养箱内振荡培养。

进一步的，四号培养基置于培养室培养架上培养。

进一步的，在一号培养基、二号培养基和三号培养基中的培养条件相同，均为：培养温度23±2℃，光照强度3000-4000lx，光照时间14h。

进一步的，在培养室培养架上的培养条件为：培养温度23±2℃，光照强度 3000-4000lx，光照时间14h。

进一步的，取高度2cm以上的组培苗，无菌条件下用无菌水清洗后接种到一号培养基中。