[发明专利]一种高活性林蛙抗氧化肽口服液及其制备方法

权利要求书

1.一种高活性林蛙抗氧化肽口服液，其特征在于按重量份计，由以下组分制备而成：

由0.1～0.6重量份分离出的高活性林蛙抗氧化肽，5～30重量份的澄清山楂汁，0.2～1.2重量份的柠檬酸，4～24重量份的蔗糖，50～90重量份的纯净水组成。

2.根据权利要求1所述的一种高活性林蛙抗氧化肽口服液的制备方法，至少包含以下步骤：

1)高活性林蛙抗氧化肽的制备：

(a)分离纯化多肽样液的配制

称取林蛙多肽溶于超纯水，配制成100mg/mL的多肽溶液，4℃保存，以备后用；

(b)凝胶色谱柱的制备

取SephadexG15凝胶干粉,加入凝胶干粉重量份8～12倍的超纯水中溶解,于电加热炉上煮沸直到充分溶胀，静置冷却至室温，将凝胶溶胀液搅拌均匀，连续缓缓灌入层析柱中,注意无气泡无断层，使沉降的凝胶高度在层析柱的2/3～4/5长度，保持液面平整。以超纯水为流动相,控制泵的流速在15～45mL/min,使柱子过夜平衡；

(c)进样

调节泵的流速使床面以上的蒸馏水流出至刚好露出床面关掉泵，不要破坏柱子表面的平整，用注射器取沉降凝胶体积的1/50～1/20的多肽样液，顺着柱壁缓缓注入，待样液进入床内缓缓往下渗入至床面重新露出，及时打开泵调节流速在5～10mL/min使超纯水缓缓沿壁滑入柱内保证液面平整，注入超纯水体积为整个层析柱体积的1/15～1/8后，调节泵自动进水洗脱，控制流进水流速为15～45mL/min；

(d)检测与接样

于测定蛋白的吸光度280nm波长处检测其吸收峰，并且通过软件显示吸收峰，根据吸收峰可接到三组样品；

(e)真空冷冻干燥

将三组不同吸收峰的样液转移置培养皿中，于-80℃冰箱中放置8小时，然后控制真空度为0.34Mpa，真空冷冻干燥24小时，制得分离纯化粉制样品，4℃冷藏保存，以备后用；

(f)抗氧化活性检测

将分离得到的不同分子量的三个组分再分别进行DPPH清除率、还原力、羟自由基清除率及超氧阴离子清除率的测定，得到抗氧化活性最高的一个组分为高活性林蛙抗氧化多肽；

2)澄清山楂汁的制备

(a)水和原料预处理

蒸馏水用超滤净水器过滤净化，达到无菌、硬度小于5、无异味，选择新鲜的山碴，充分清洗后浸泡6～10h再加热煮沸0.5～2h，使山碴组织充分软化；

(b)浸提工艺

将充分软化的山楂组织剪碎，在浸提温度50～90℃，浸提时间0.5～1.5h，料水比1:10～1:5的条件下，过滤得到的浸提液；

(c)过滤及离心

将浸提得到的山楂汁用200～500目滤布进行过滤，取过滤液于2000～5000r/min离心5～20分钟，取上清液即得到澄清山楂汁；

3)口服液的制备

(a)混合调配

将0.1～0.6重量份的高活性林蛙抗氧化多肽粉，5～30重量份的山楂澄清液，0.2～1.2重量份的柠檬酸，4～24重量份的蔗糖，50～90重量份的纯净水，依次加入到混合容器中，搅拌均匀；

(b)罐装杀菌冷却

将所得的混合液杀菌、灌装、冷却，即得高活性林蛙抗氧化多肽口服液成品。