[发明专利]一种结核病疫苗及其制备工艺

权利要求书

1.一种结核病疫苗，其特征在于，包括重组慢病毒表达质粒pLenti-spHL47/pLenti-spHI1和包装有该重组慢病毒表达质粒的慢病毒。

2.根据权利要求1所述的一种结核病疫苗，其特征在于，重组慢病毒表达质粒pLenti-spHL47/pLenti-spHI1包括慢病毒框架质粒、巨噬细胞特异性启动子、表达基因、IFN-γ诱生蛋白和内部核糖体结合序列。

3.根据权利要求2所述的一种结核病疫苗，其特征在于，所述慢病毒框架质粒为CS-CDF-CG-PRE。

4.根据权利要求2所述的结核病疫苗，其特征在于，所述巨噬细胞特异性启动子为SP146。

5.根据权利要求2所述的结核病疫苗，其特征在于，所述表达基因为hspX基因。

6.根据权利要求2所述的一种结核病疫苗，其特征在于，所述IFN-γ诱生蛋白为lrg47和/或irgm1基因。

7.根据上述任一权利要求所述的结核病疫苗的制备工艺，其特征在于，通过核糖体结合序列连接结核分枝杆菌潜伏感染期特异性表达的基因Y和lrg47/irgm1基因，将其克隆入慢病毒表达载体中，采用巨噬细胞特异性启动子控制基因的表达，后将该慢病毒表达载体包装成慢病毒。

8.根据权利要求7所述的一种结核病疫苗的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用巨噬细胞特异性启动子X替换慢病毒框架质粒CS-CDF-CG-PRE中的CMV启动子，获取巨噬细胞特异性表达慢病毒空表达载体pLenti-X；

(2)获取结核分枝杆菌潜伏感染期特异表达的Y基因，将其插入pLenti-X中，获取重组慢病毒表达质粒pLenti-Y，同时将Y基因克隆入质粒pIRES中，获取重组质粒pIRES-Y；

(3)获取lrg47和irgm1基因，并分别克隆入质粒pIRES-Y中，构建Y-IRES-lrg47和Y-IRES-irgm1序列；

(4)采用巨噬细胞特异性启动子X替换慢病毒框架质粒CS-CDF-CG-PRE中的CMV启动子，获取巨噬细胞特异性表达慢病毒表达载体pLenti-X，再将Y-IRES-lrg47和Y-IRES-irgm1序列分别克隆至pLenti-X中，获取重组慢病毒表达载体pLenti-HIL47和pLenti-HII1；

(5)采用慢病毒表达质粒pLenti-X、pLenti-Y、pLenti-HIL47或pLenti-HII1，与慢病毒包装质粒pMD₂G和pSPAX₂共转染293T细胞，获取重组慢病毒颗粒，浓缩慢病毒颗粒，分别获取空载慢病毒(LV-X)、Y重组慢病毒(LV-Y)、治疗性疫苗，即Y、LRG47共表达慢病毒LV-HIL47、Y和IRGM1共表达慢病毒LV-HII1。

9.根据权利要求8所述的一种结核病疫苗，其特征在于，步骤(1)中的X至少为SP146。

10.根据权利要求8所述的一种结核病疫苗，其特征在于，步骤(2)中的Y至少为hspX。