[发明专利]一种检测两种肿瘤标志物的适体探针、电化学生物传感器及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种检测两种肿瘤标志物的适体探针，其特征在于，包括适体序列，所述适体序列与肿瘤标志物Ⅰ特异性识别并紧密结合，所述适体探针的5’端和3’端互补杂交，使所述适体探针形成发夹结构，所述发夹结构的茎干部分包括肿瘤标志物Ⅱ的识别序列，且包括限制性内切酶的识别位点；

所述适体探针的核苷酸序列为：5’-GATCCGGTTGGTGTGGTTGGCCGGATC-3’，所述肿瘤标志物Ⅰ为凝血酶，所述肿瘤标志物蛋Ⅱ为M.Sss IDNA甲基化转移酶；

所述限制性内切酶为Hpa II限制性核酸内切酶，所述适体探针的5’端修饰有捕获分子巯基，3’端修饰有二茂铁。

2.一种电化学生物传感器，其特征在于，将权利要求1所述的适体探针固定在工作电极表面制备得到。

3.一种如权利要求2所述的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对工作电极进行预处理，得到预处理的工作电极；

(2)将适体探针修饰固定到预处理的工作电极表面，得到修饰有适体探针的工作电极；

(3)封闭修饰有适体探针的工作电极表面未反应位点，即得。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述工作电极为金电极，对工作电极进行预处理的步骤为：将工作电极在氧化铝粉浆中于麂皮上进行抛光处理，直至成镜面后用蒸馏水冲洗，进而在二次水、乙醇、二次水中各超声3～8min，然后将工作电极浸泡在Piranha溶液中浸泡10～20min，用二次水冲洗后将工作电极在0.05～0.15M的H₂SO₄中于-0.3V至+1.5V之间进行循环伏安扫描，再将清洗过的工作电极用二次水冲洗，得到预处理的工作电极。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，将适体探针修饰固定到预处理的工作电极表面的步骤为：将3.0～4.0μM的适体探针15～25μL滴加到预处理的工作电极表面，室温下自组装10～160min，

在步骤(3)中，封闭修饰有适体探针的工作电极表面未反应位点的步骤为：将0.5～1.5mM的巯基己醇或巯基乙醇15～25μL滴加到修饰有适体探针的工作电极表面，室温下孵育10～20min。