[发明专利]一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法

说明书

一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，包括如下步骤：S1.选育弗兰克氏菌种；S2.将步骤S1得到的弗兰克氏菌的纯菌种通过基因诱变方法进行处理，得到速生弗兰克氏菌种；S3.将步骤S2得到的速生弗兰克氏菌种接种到发酵罐里灭过菌的发酵原料中，形成菌体培养料，对菌体培养料进行发酵培养，形成菌丝；S4.将步骤S3得到的菌丝进一步分化出孢子，用无菌水进行洗脱，得到菌液，在菌液中加入无菌活性炭用于吸附孢子，待孢子吸附完成后，将含有孢子的活性炭与液体分离，得到以活性炭为载体的菌体；S5.将步骤S4得到的菌体通过真空冷冻干燥法进行冻干处理，获得菌粉；本发明提供一种接种效果好、生长速度快、易于大规模工业化生产的速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法。

技术领域

本发明涉及微生物肥料添加剂加工领域，特别是一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法。

背景技术

共生固氮菌是指能与宿主植物的根部形成特定固氮组织结构—根瘤的一类微生物。它们彼此共生在一起，植物向微生物提供光合产物，供微生物生长发育固氮所需，微生物则向植物提供固定的氮素营养，双方互为有利。这类固氮菌有豆科植物根瘤固氮菌和弗兰克氏菌。据测定，根瘤菌每年每公顷可固定纯氮约为13.3公斤，约折合标准化肥130斤,这些氮素几乎都被可被植物利用。

弗兰克氏菌是放线菌目中的一个唯一能固定大气中氮素的属。它的固氮量又大于豆科根瘤菌的3-5倍以上，占共生固氮总量的60％以上，占地球上氮素来源的80％以上。像桤木根部弗兰克菌固氮量为85-300公斤氮/公顷/年，红枝桤木为140-209公斤氮/公顷/年，沙棘为47-179公斤氮/公顷/年。固定大气中1kg氮素相当于施2.5kg的尿素肥，这些植物一年的固氮量相当于亩施24-50kg的尿素肥，而大豆只相当于亩施14kg尿素。随着放线菌植物树龄的增长，每年都有新增50％以上的新生根瘤，所以固氮总量随树龄的增加成递增式增长。可见，弗兰克氏菌结瘤固氮，对地球上可利用化合态氮的来源与陆地生态系统中氮循环和生态平衡起着极为重要的作用，同时也绿化了大地，提高了土壤肥力，创建和改善了人类生存条件和质量，起到了巨大的生态学效益。

在自然生长环境下，弗兰克菌在300多种放线菌结瘤植物的根部含量很高，但在普通土壤中含量很少，用DNA法测定，一般土壤中弗兰克菌的含量只有106个/克土壤干重，在雨林、耐旱森林和草原土壤中弗兰克菌和丛枝菌根真菌合起来最高含量是340个/克土壤干重，在沿海沼泽森林地是145个/克土壤干重，草原沼泽湿地缺乏到只有61个/克土壤干重，而且绝大多数弗兰克菌不能共生结瘤固氮。普通土壤中弗兰克菌的含量少于细菌上千倍以上，所以，在普通土壤中起不到自生固氮培土增肥的作用。弗兰克菌在100年以前就发现了，但人工培养成功是1976年美国从香蕨木首次分离出来，但它却是一个典型的“慢生菌”，一个繁殖周期需要13-15个小时，要想拿到1g干菌粉，需要几个月的时间。至今为止，世界上科学家们只能进行理论研究，而不能进行应用研究，这就是40年来一直没有解决的瓶颈难题。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺点，本发明的目的是提供一种接种效果好、生长速度快、易于大规模工业化生产的速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，该菌粉作为生物肥料添加剂使用，能固氮配肥，促进植物生长，增肥土壤，杀伤有害菌类，改造退化土壤盐碱土和重金属污染土壤。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，包括如下步骤：

S1.选育弗兰克氏菌种：选取放线菌结瘤植物的根部根瘤，通过菌种选育方法进行处理培养，最终筛选得到弗兰克氏菌的纯菌种；

S2.将步骤S1得到的弗兰克氏菌的纯菌种通过基因诱变方法进行处理，得到速生弗兰克氏菌种；

S3.将步骤S2得到的速生弗兰克氏菌种接种到发酵罐里灭过菌的发酵原料

中，形成菌体培养料，设置发酵罐温度为28～32℃，对菌体培养料进行5～7天的发酵培养，形成菌丝；