[发明专利]一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法

权利要求书

1.一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法，其特征在于，包括以下组分：重组人白介素-2、人血白蛋白、聚乙二醇、海藻糖，以及基础培养基或注射用氯化钠。

2.根据权利要求1所述的一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法，其特征在于：所述免疫细胞冻存液包括：重组人白介素-250-200U/mL；聚乙二醇0.1-0.4g/mL；海藻糖0.05-0.3g/ml；人血白蛋白0.01-0.1g/ml基础培养基或注射用氯化钠90-99体积％，总量为100％。

3.根据权利要求1所述的一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法，其特征在于：所述外周血单核细胞冻存液中的重组人白介素-2的含量为50-200U/mL，例如可以是50U/mL、60U/mL、80U/mL、100U/mL、120U/mL、150U/mL、1600U/mL、180U/mL、200U/mL，所述外周血单核细胞冻存液中的聚乙二醇含量为0.1-0.4g/mL，例如可以是0.1g/mL、0.12g/mL、0.15g/mL、0.2g/mL、0.22g/mL、0.25g/mL、0.3g/mL、0.32g/mL、0.35g/mL、0.38g/mL、0.4g/mL，所述外周血单核细胞冻存液中的海藻糖含量为0.05-0.3g/mL，例如可以是0.05g/mL、0.1g/mL、0.15g/mL、0.2g/mL、0.25g/mL、0.3g/mL，所述外周血单核细胞冻存液中的基础培养基或注射用氯化钠的体积百分含量为90％、90.5％、91％、91.5％、92％、92.5％、93％、93.5％、94％、94.5％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％，所述外周血单核细胞冻存液中的人血白蛋白含量为0.01-0.1g/mL，例如可以是0.01g/mL、0.02g/mL、0.03g/mL、0.04g/mL、0.05g/mL、0.06g/mL、0.07g/mL、0.08g/mL、0.09g/mL、0.1g/mL，当在外周血单核细胞冻存液中还含有除重组人白介素-2、聚乙二醇、海藻糖、人血白蛋白组分以外的其它组分时，所述基础培养基或注射用氯化钠的含量会进行适当的下调，比如降低为80％-95％，例如所述基础培养的含量还可以是80％、80.5％、81％、81.5％、82％、82.5％、83％、83.5％、84％、84.5％、85％、85.5％、86％、86.5％、87％、87.5％、88％、88.5％、89％、89.5％，以满足所述免疫细胞冻存液中各组分含量之和为100％，所述外周血单核细胞冻存液中的重组人白介素-2、聚乙二醇、海藻糖、人血白蛋白，以及基础培养基或注射用氯化钠可以采用上述各组分所选择的含量进行任意配合，各组分的体积百分含量之和为100％。

4.根据权利要求1所述的一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法，其特征在于：所述外周血单核细胞冻存液包括：重组人白介素-2100-200U/mL；聚乙二醇0.2-0.4g/mL；海藻糖0.1-0.2g/mL；基础培养基或注射用氯化钠95-99体积％。

5.根据权利要求1所述的一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法，其特征在于：所述外周血单核细胞冻存液中，所述基础培养基为DMEM/F12培养基(Gibco)或淋巴细胞培养基[X-VIVOTM15(LONZA)、HIPP-T009(倍谙基)]，且所述淋巴细胞培养基为HIPP-T009(倍谙基)，其均可购自倍谙基公司。

6.根据权利要求1所述的一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法，其特征在于：所述免疫细胞为T细胞、自然杀伤细胞或CIK细胞中的任意一种。

7.根据权利要求1所述的一种外周血单核细胞完全无血清冻存液及其方法，其特征在于：本发明提供了一种外周血单核细胞的冻存方法，包括一下步骤：

(1)将外周血单核细胞与本发明所述的外周血单核细胞冻存液混合；

(2)进行程序降温至-80℃，然后转移至液氮中冷冻保存。