[发明专利]猪瘟病毒单克隆抗体HK24及医用用途

权利要求书

1.一种猪瘟病毒单克隆抗体HK24的制备方法，包括以下步骤：

在猪21-30日龄和65日龄时分别注射1次猪瘟疫苗，间隔一周后加强免疫一次，共免疫三次；

用猪瘟病毒抗体检测试剂盒检测免疫后猪血清中抗体含量，选择抗体含量较高的实验猪，前腔静脉采血获得血样，之后使用淋巴细胞分离液对血样进行密度梯度离心，分离出猪淋巴细胞；

所得淋巴细胞使用FITC标记的抗猪IgG 和5-tamra标记的特异性表位CTAVSPTTLRTEVVK同时标记，利用流式细胞术筛选出抗体分泌细胞群，并使用显微操作技术将所得细胞群分离为单个状态，即为单个抗体分泌细胞；

使用Smart-seq2技术获得单个抗体分泌细胞cDNA，步骤为：将单个细胞放入含有2μl裂解液，即0.1 μl RNase抑制剂和1.9 μl 体积分数为0.2% 的Triton X-100、1 μl oligo-dT和 1 μl dNTP的0.2-ml PCR 管中进行裂解；

利用SuperScript II 反转录酶获取单个抗体分泌细胞全长cDNA，并使用KAPA HiFiHotStart ReadyMix进行预扩增，之后使用特定引物，以预扩增产物为模版进行巢式PCR，扩增得到抗体重链、轻链基因全长序列，通过表达及鉴定获得了一对能够特异性结合并中和猪瘟病毒的单克隆抗体，命名为HK24；

所述HK24的重链全长氨基酸序列为SEQ ID 1，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID3；

所述HK24的轻链全长氨基酸序列为SEQ ID 5，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID7；

能够编码抗体重链全长核酸序列为SEQ ID 2；所述抗体的重链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 4；

能够编码抗体轻链全长核酸序列为SEQ ID 6；所述抗体的轻链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 8。

2.根据权利要求1制备的猪瘟病毒单克隆抗体HK24在制备诊断或检测猪瘟病毒试剂中的用途。

3.根据权利要求1制备的猪瘟病毒单克隆抗体HK24在制备预防治疗猪瘟生物制剂中的用途。