[发明专利]一种在纸靶片上进行蛋白质样品酶解检测的方法

权利要求书

1.一种在纸靶片上进行蛋白质样品酶解检测的方法，具体地说是在纸靶片上进行蛋白质样品固载收集、原位酶解和激光解析离子化质谱检测的方法，其特征在于：蛋白质样品溶液直接固载于纸靶片上，之后将缓冲溶液和蛋白酶溶液依次滴加到纸靶片上进行原位高效酶解反应，酶解反应结束后将基质滴加到纸靶片上，最后利用激光解析离子化质谱(LDI-MS)直接检测纸靶片上的酶解产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述纸靶片可以是滤纸或打印纸等纸类，并剪裁成所需形状和尺寸；

所述缓冲溶液为碳酸氢铵等无机缓冲溶液和醋酸铵、三羟甲基氨基甲烷(Tris)等有机缓冲溶液中的一种或二种以上；

所述蛋白酶为胰蛋白酶(trypsin)，胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin),胃蛋白酶(pepsin)等特异性蛋白质水解酶中的一种或二种以上；

所述基质为2，5-二羟基苯甲酸(DHB)、α-氰基-4羟基肉桂酸(CHCA)、芥子酸(SA)等有机基质；

可酶解和检测的蛋白质样品为牛血清白蛋白(BSA)等纯蛋白质样品中的一种或二种以上，或血液、血清、食品、环境污染物等复杂蛋白质样品中的一种或二种以上。

3.根据权利要求1或2所述的方法，具体过程为，

1)配制浓度为50-100mM，pH为7.8-8.5的缓冲溶液；

2)配制浓度为0.1-10mg/mL的蛋白酶溶液，为蛋白酶溶液；

3)配制浓度为5-50mg/mL的基质溶液，为基质；

4)将浓度为1-10mg/mL蛋白质样品溶液以滴加的方式固载到纸靶片上，蛋白质样品溶液的滴加量为0.1-10μL；

5)将缓冲溶液和蛋白酶溶液以滴加的方式依次滴加到步骤4)中带有蛋白质样品的纸靶片上，使蛋白质样品与蛋白酶的质量比为5:1-20:1；

6)将步骤5)得到的带有蛋白质样品和蛋白酶溶液的纸靶片置于37℃反应0.5-72h；

7)待步骤6)中纸靶片上的酶解反应结束且干燥后，将基质以滴加的方式滴加到含有酶解产物的纸靶片上，使其能够覆盖酶解产物；

8)将步骤7)得到的带有酶解产物并覆盖基质的干燥的纸靶片直接进行原位LDI-MS检测。