[发明专利]一种母体外周血血浆快速分离方法及其应用

说明书

本发明公开了一种母体外周血血浆快速分离方法及其应用。血浆快速分离方法包括：对离体的母体外周血进行一步离心获得血浆。分离后的血浆经游离DNA提取、文库构建、高通量测序、生物信息分析后，与两步离心法的血浆相比，游离DNA浓度、游离DNA片段分布、胎儿DNA浓度、测序片段分布均相当，可应用于游离DNA提取，胎儿核酸信息获取，及无创产前基因筛查产品。本发明打破传统的血浆分离需两步离心法的认知和做法，简化了血浆分离的操作流程和减少人力、物力投入，具有很好的市场应用价值。

技术领域

本发明涉及游离核酸测序领域，具体涉及一种母体外周血血浆快速分离方法及其应用。

背景技术

20世纪40年代，法国科学家Mandel和Metais发现外周血中存在游离于细胞外的DNA，称之为外周血游离DNA(Circulating DNA in plasma or serum)。1997年，卢煜明等在怀有男胎孕妇的外周血中检测到Y染色体的特异性序列，证明孕妇外周血中存在游离胎儿DNA(cell-free fetal DNA，cffDNA)，cffDNA的发现为无创性产前基因筛查(NIPT)胎儿出生缺陷性疾病开辟了新纪元。与传统有创侵入性(绒毛膜取样、羊水穿刺和脐带血穿刺)的产前诊断相比，无创产前基因筛查具备无创采样、高通量、快速出结果的优势，目前最为人熟知的应用是用于评估胎儿常见染色体非整倍体(T21、T18和T13)异常风险。

无创产前基因筛查(NIPT)包括母体外周血血浆分离、血浆游离DNA提取、高通量测序、生物信息学分析步骤。胎儿DNA浓度对无创产前的胎儿基因组异常检测的准确性至关重要，胎儿DNA浓度为无创产前基因检测的关键质控点。母体外周血中游离DNA大部分来源于母体自身的细胞凋亡，仅极少部分来源于胎儿，而外周血离体后有核血细胞的裂解影响到总游离DNA的浓度及胎儿DNA浓度检测的准确性。因此，有效分离母体外周血血浆是保证游离DNA胎儿浓度的关键因素之一。

目前母体外周血血浆分离采用经典的两步离心法：一步低速离心之后，取血浆进行第二步高速离心，以确保完全除去母体有核细胞。然而两步离心法中间涉及一次转管操作，这增加了在血浆分离环节样本混淆的概率；并且离心设备需要支持采血管低速离心和离心管高速离心，以上条件无形增加了人力和物料成本。因此，开发一种快速、简化，且不影响胎儿游离DNA浓度的血浆分离方法，对于获取胎儿核酸信息和开展无创产前基因检测有重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种母体外周血血浆快速分离方法及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种母体外周血血浆快速分离方法，所述方法包括：对离体的母体外周血进行一步离心获得血浆。

优选的，5～10mL母体外周血，一步离心的总离心力为10000～100000(g·min)。

进一步优选的，5～10mL母体外周血，一步离心的总离心力为16000～64000(g·min)。

进一步优选的，5～10mL母体外周血，一步离心的相对离心力为1600～3200g，离心时长为10～20min。

其中，母体外周血选自保质的母体外周血；处于正常状态或微溶血状态或中度溶血状态的母体外周血。

上述的母体外周血血浆快速分离方法在游离DNA提取、胎儿核酸信息获取中的应用。

一种游离DNA提取方法，所述方法包括：利用上述的母体外周血血浆快速分离方法获得血浆，从血浆中提取游离DNA。

优选的，采用硅胶膜柱离心法或磁珠法从血浆中提取游离DNA。

一种胎儿核酸信息获取系统，包括：

血浆一步分离装置：用于利用上述的母体外周血血浆快速分离方法获得血浆；