[发明专利]一种检测桃拉综合症病毒的LAMP引物组、试剂盒及方法在审
申请号: | 201810324836.5 | 申请日: | 2018-04-12 |
公开(公告)号: | CN108411038A | 公开(公告)日: | 2018-08-17 |
发明(设计)人: | 薄清如;罗宝正;邵建宏;赵福振;陈轩;王珊;徐海聂;沙才华;廖秀云;黄海超 | 申请(专利权)人: | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 胡辉 |
地址: | 519000 广东省珠*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 实时荧光 桃拉综合征病毒 桃拉综合症病毒 病原体检测 反应时间短 技术支持 检测试剂 快速检测 特异性强 稳定性强 灵敏度 试剂盒 种检测 检测 鉴别 应用 | ||
1.一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测的引物组,其特征在于,引物组的核苷酸序列如下所示:
桃拉综合症病毒外引物:
TSV-F3:5'-ATGTGTTGTTGTGTGAGGAA-3',
TSV-B3:5'-CTCATCAAAGGTCACAGGG-3';
桃拉综合症病毒内引物:
TSV-FIP:5'-AGACGCTACATCTCGAGCTGTAACGTGTCGGATTGTTAGTG-3',
TSV-BIP:5'-CCAATGTGCACATGCACTCTCAATTCCAGAGCTTCACAAGG-3';
桃拉综合症病毒环引物:
TSV-LF:5'-GCTGTACCAACAGCAGTTAGA-3',
TSV-LB:5'-CATTCCCTCCCGTATGAGAATT-3'。
2.一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒,其特征在于,该试剂盒中含有权利要求1所述的引物组。
3.一种桃拉综合症病毒的实时荧光LAMP检测方法,其特征在于,包含以下步骤:
1)提取样本RNA;
2)以提取的RNA作为模板,使用权利要求1所述的引物TSV-F3、TSV-B3、TSV-FIP、TSV-BIP、TSV-LF和TSV-LB进行实时荧光LAMP扩增反应获得产物;
3)根据扩增曲线进行分析,确定样品中是否含有桃拉综合症病毒;
上述方法不用于疾病的诊断和治疗。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,实时荧光LAMP扩增反应体系为:
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。
6.根权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的逆转录酶为AMV逆转录酶。
7.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述的封闭液为甘油。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,步骤2)的实时荧光LAMP反应程序为:63℃反应30s;63℃反应15s,63℃反应45s,循环60次;并在63℃反应45s时收集FAM荧光通道的信号。
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