[发明专利]一种快速检测HIV-1的SPRi生物芯片制备方法及其应用

说明书

本发明旨在提供一种检测特异性高、过程简单、检测时间短且无基因遗传变异问题的快速检测HIV‑1的SPRi生物芯片制备方法及其应用。本发明方法包括以下步骤：用pH值为5.0的10mM 醋酸钠对HIV‑1 gp41蛋白和抗人IgG进行稀释，使用接触法点样至CS金芯片，室温环境作用16h；用蒸馏水对CS金芯片清洗后依次使用pH值为9.0的500μL 1M乙醇胺和pH值为1.85的10mM甘氨酸分别浸润10min，制得快速检测HIV‑1的SPRi生物芯片；上述SPRi生物芯片可在快速检测HIV‑1相关蛋白中应用。本发明应用于生物检测领域。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种快速检测HIV-1(人类免疫缺陷病毒I型)相关蛋白的SPRi(表面等离子共振成像)生物芯片的制备及其应用。

背景技术

早检测是对艾滋病等传染病防控的前提，只有早检测才能早发现并进行早治疗。因此，开发快速、准确的检测试剂对于传染病的防控至关重要。目前艾滋病的检测方法主要有金标试纸法、酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光法、核酸检测法等。

基于层析原理的金标法检测试纸，其优点是可在15分钟内得出结果，但是灵敏度与特异性都差。ELISA检测试剂经历过四次变革。第一代试剂盒于1985年3月面世，其原理为间接ELISA法，因而，灵敏度和特异性不高，出现许多假阴性和假阳性。1990年5月第二代使用基因重组或合成多肽抗原的HIV诊断试剂盒面世。第二代诊断试剂盒窗口期比第一代诊断试剂盒缩短了约20天，灵敏度和特异性也有所提高，但易发生漏检。1994年出现的第三代HIV诊断试剂盒一改过去间接法检测原理，利用双抗原夹心法，灵敏度进一步提高，窗口期也进一步缩小了。第四代HIV诊断试剂盒是一种HIV-1/HIV-2抗体与HIV-1 O亚群抗体及p24抗原的联合检测方法。相比于第三代筛查试剂，它由于增加了p24抗原的检测，极大地缩短了检测的窗口期。但是这些ELISA检测试剂一般需要2小时左右才能知道检测结果。化学发光法目前应用的艾滋病检测试剂盒主要有HIV P24抗原和HIV-1/2抗体做定性检测，从检测窗口期方面等同于ELISA四代试剂，但是更精准，但检测成本更高一些。近年来发展起来的核酸检测技术能够特异的在核酸水平检测出艾滋病毒，但该法需要历经核酸提取、PCR扩增、电泳检测等步骤，耗时较长，人员技术要求高,并且由于HIV-1病毒基因序列变异很快，检测探针不能满足要求，经常会出现漏检或者假阴性结果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种检测特异性高、过程简单、检测时间短且无基因遗传变异问题的快速检测HIV-1的SPRi生物芯片制备方法及其应用。

本发明所采用的技术方案是，本发明方法包括以下步骤：

（1）用pH值为5.0的10mM 醋酸钠对HIV-1 gp41蛋白和抗人IgG进行稀释，使用接触法点样至CS金芯片，室温环境作用16h；

（2）用蒸馏水对CS金芯片清洗后依次使用pH值为9.0的500μL 1M乙醇胺和pH值为1.85的10mM甘氨酸分别浸润10min，制得快速检测HIV-1的SPRi生物芯片，可上机使用。

上述方案可见，由本发明方法制得的用于检测HIV-1的SPRi生物芯片，对HIV-1相关蛋白的测定显示了快速、简便、特异性好、稳定的能力。与现有技术比较，本发明具有免标记、可实时监测、快速、操作简单、检测周期短、特异性好等特点。

进一步地，对于使用后的快速检测HIV-1的SPRi生物芯片，还包括芯片再生步骤：将pH值为1.85的200μL 10mM甘氨酸注射入加样口，以清除已结合在芯片表面的物质，使芯片再生和重复利用。

上述方案可见，通过芯片再生和重复使用，避免了芯片的浪费，大大地节省了成本。