[发明专利]检测马铃薯X病毒用的引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测马铃薯X病毒用的引物、试剂盒及方法，其中引物包括PVX‑F3；PVX‑B3；PVX‑FIP；PVX‑BIP。本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种快速、简便、高效、准确性高、特异性强、灵敏性高，马铃薯X病毒RT‑LAMP检测用的引物；本发明另一个目的是提供一种包含上述引物的用于检测马铃薯X病毒的试剂盒；本发明另一个目的是提供一种采用上述马铃薯X病毒RT‑LAMP检测方法。

技术领域

本发明涉及一种马铃薯X病毒RT-LAMP鉴定用的引物、试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

马铃薯X病毒Potato virus X，PVX又称马铃薯潜隐病毒Potato latent virus或马铃薯轻花叶病毒Potato mild mosaic virus，为马铃薯X病毒属Potexvirus模式成员，是由一条正链RNA组成的线性病毒，RNA长约6.4kbp，病毒粒子呈长杆状，长×宽＝515nm×13nm。自然条件下主要靠寄主植株不同部位、寄主植株之间接触摩擦进行机械传播。PVX单独侵染时症状较轻，与马铃薯Y病毒Potato virus Y，PVY、烟草脉斑驳病毒Tobacco veinmottling virus，TVMV、烟草蚀纹病毒Tobacco etch virus，TEV等马铃薯Y病毒属病毒复合侵染时症状加剧，造成严重经济损失。

所有马铃薯Solanum tuberosum产区均存在PVX发生的现象，但不同栽培品种受PVX侵染情况存在较大差异，有些品种带毒率较高。在田间，PVX侵染马铃薯植株，引起轻型花叶或者潜隐病征，若多年侵染则易引起重花叶或者植株矮化，造成10％-80％减产。PVX常与PVY复合侵染，使症状加剧。PVX主要靠汁液接触传播，也可以由某些昆虫如异黑蝗Melanoplus differentialis和绿丛螽斯Tettigonia viridissima的咀嚼式口器经机械作用传播，菟丝子Cuscuta campestris和集合油壶菌Synchytium endobiotcum也能够传播该病毒，但实生种子不能传毒。PVX寄主范围较广，可侵染16科240种植物，茄科植物是主要的寄主，其诊断寄主有白肋烟White burley及其他烟草Nicotiana tabacum品种。初侵染的叶片通常表现为坏死斑，之后发展为坏死斑驳、褪绿、花叶或脉褪绿。在曼陀罗Daturastramonium上继斑驳之后产生褪绿环，脉褪绿或脉坏死。烟草栽培品种适于作繁殖寄主。千日红Gomphrena globosa是较好的指示植物，除HB株系外都产生局部斑。对于PVX株系的分类还未有统一的标准，但Cockerham的方法认可度较高，该方法根据PVX侵染携带不同抗病基因Nx和Nb的马铃薯植株所表现出的症状，将PVX株系分为4组，分别是X1、X2、X3和X4。X1组如CS35株系在含Nx、Nb基因的马铃薯上均能引起过敏反应Hypersensitive resistance，HR。X2组如CP株系只在含Nb基因的马铃薯上引起HR。X3组如UK3、DX株系只在含有Nx基因的马铃薯上引起HR。X4组如DX4、CP4、HB株系则能完全克服Nx、Nb抗性。许多研究表明，PVX的外壳蛋白Coat protein，CP基因在决定PVX与植物抗病基因互作方面起着重要作用。CP可作为激发子使马铃薯产生HR、ER,极端抗病性extremeresistance，ER反应，CP基因核苷酸序列的变化会导致寄主产生不同的症状类型。因此，PVX的CP基因序列分析也有助于对PVX的分类研究。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种快速、简便、高效、准确性高、特异性强、灵敏性高，马铃薯X病毒RT-LAMP鉴定用的引物；

本发明另一个目的是提供一种包含上述引物的用于鉴定马铃薯X病毒的试剂盒；

本发明另一个目的是提供一种采用上述马铃薯X病毒RT-LAMP鉴定方法。

为了达到上述目的，本发明采用以下方案：

一种马铃薯X病毒RT-LAMP鉴定用的引物，其特征在于包括：