[发明专利]一种编码β-甘露聚糖酶的基因，以及含该基因的重组质粒和重组菌及其构建方法在审
| 申请号： | 201810317332.0 | 申请日： | 2018-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN110358780A | 公开（公告）日： | 2019-10-22 |
| 发明（设计）人： | 谢建华;徐莉敏;何志梅;王铮;陈伟海 | 申请（专利权）人： | 东莞泛亚太生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12N9/42;C12P19/14;C12P19/02;C12R1/84 |
| 代理公司： | 东莞市科安知识产权代理事务所(普通合伙) 44284 | 代理人： | 曾毓芳 |
| 地址： | 523000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甘露聚糖酶 基因 重组质粒 重组菌 构建 核苷酸序列 | ||
1.一种编码β-甘露聚糖酶的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQUENCENO.2所示。
2.一种重组质粒，其特征在于，包含如SEQ ID NO.2所示的基因，所述重组载体为重组pPICZaA质粒，所述基因插入所述pPICZaA质粒的多克隆位点。
3.一种重组菌，其特征在于，包含如权利要求2所述的重组质粒。
4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌为重组毕赤酵母GS115菌株。
5.一种如权利要求2所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)密码子偏向性优化：对β-甘露聚糖酶的核苷酸序列SEQ ID NO:1根据酵母菌的密码子偏好性进行改造，获得适宜在酵母菌内高效表达的核苷酸序列SEQ ID NO:2；
2)pPICZaA表达载体构建：以质粒pPICZaA为载体，将核苷酸序列SEQ ID NO:2插入启动子AOX1下游，5'端酶切位点为EcoR I，3'端酶切位点为Not I，构建pPICZaA-LrMan5B表达载体。
6.一种β-甘露聚糖酶的体外表达方法，其特征在于，所述β-甘露聚糖酶的核苷酸序列如SEQUENCE NO.2所示，包括如下步骤：
1)密码子偏向性优化：对β-甘露聚糖酶的核苷酸序列SEQ ID NO:1根据酵母菌的密码子偏好性进行改造，获得适宜在酵母菌内高效表达的核苷酸序列SEQ ID NO:2；
2)pPICZaA表达载体构建：以质粒pPICZaA为载体，将核苷酸序列SEQ ID NO:2插入启动子AOX1下游，5'端酶切位点为EcoR I，3'端酶切位点为Not I，构建pPICZaA-LrMan5B表达载体；
3)重组蛋白表达：将所述的pPICZaA-LrMan5B表达载体线性化，电转导入处于化学感受态的表达菌株Pichia pastoris X33，形成重组表达菌株pPICZaA-LrMan5B-Pichiapastoris X33，挑选高效表达的阳性克隆进行培养，并利用甲醇诱导重组表达菌分泌表达β-甘露聚糖酶。
7.用权利要求1所述的β-甘露聚糖酶水解生产甘露糖的方法，其特征在于，β-甘露聚糖酶和β-甘露糖苷酶协同生产甘露糖。
8.β-甘露聚糖酶和β-甘露糖苷酶协同生产甘露糖的应用。
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