[发明专利]用于提高哺乳动物细胞转基因表达的调控序列、表达载体、表达系统及其应用

说明书

本发明涉及用于提高哺乳动物细胞转基因表达的调控序列、表达载体、表达系统及其应用，属于基因工程技术领域。本发明根据CMV启动子、增强子的序列特征，结合生物学信息及实验，发明了3种用于组合启动子的调控序列，分别为人CMV启动子核心序列(hCPE)、合成的调控元件(SEE)、人巨细胞病毒即早期增强子(hCMVE)，将这三种调控序列插入表达载体的启动子上游，可以驱动外源基因高效、持续、稳定表达。同等条件下，与不含上述调控序列的表达载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。

技术领域

本发明涉及用于提高哺乳动物细胞转基因表达的调控序列、表达载体、表达系统及其应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

基因工程是以分子遗传学为理论基础，将重组表达载体导入到受体细胞中，进行复制、转录和翻译表达，生产出符合人类需要的产品或创造出生物的新性状，并使之稳定地遗传给下一代。由于哺乳动物细胞表达系统由于能够进行重组蛋白正确的折叠和翻译后修饰，对于复杂的重组蛋白，尤其是结构复杂或糖基化的蛋白质，哺乳动物细胞表达系统是其蛋白表达的优选系统。但哺乳动物表达系统普遍存在表达水平较低，转基因沉默(Transgene silencing)和转基因表达水平低下已成为基因工程产业亟待解决的关键问题。研究证实转基因虽能够整合到宿主的基因组中，且保留完整的拷贝，但是转基因却不能稳定表达或表达水平低下，有时甚至完全被抑制。为提高转基因表达水平和稳定性，研究人员在克服转基因沉默等方面进行了许多有益的尝试，比如在构建表达载体时选用强启动子、使用增强子，或在转基因操作时进行去甲基化处理等。

其中利用组合启动子(Synthetic promoter)提高转基因表达是近年来发展起来的克服转基因沉默、提高转基因表达的一种有效方法。组合启动子是调控元件和启动子的结合序列。将组合启动子整合到表达载体中能够发挥表观调控因子作用，并降低转基因沉默。目前虽然有组合启动子的报道(Brown,A.J.,Sweeney,B.,Mainwaring,D.O.&James,D.C.Synthetic promoters for CHO cell engineering.Biotechnol.Bioeng.2014,111(8):1638–1647.Sladitschek,H.L.Neveu,P.A.Bidirectional Promoter Engineeringfor Single Cell MicroRNA Sensors in Embryonic Stem Cells.PLoS One.11,2016,e0155177)。但是这些组合启动子在提高转基因表达水平方面仍不尽理想，一是组合启动子序列较长，二是转基因表达水平还有待提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于提高哺乳动物细胞转基因表达的调控序列，该序列可有效提高重组CHO细胞转基因表达水平。

本发明还提供了包含上述调控序列的表达载体及其制备方法。

本发明还提供了包含上述表达载体的表达系统及其制备方法。

本发明还提供了上述调控序列、表达载体、表达系统的应用。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种用于提高哺乳动物细胞转基因表达的调控序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，或者如SEQ ID NO:2所示，或者如SEQ ID NO:3所示。

本发明中的调控序列分别为人CMV启动子核心序列(hCPE)、合成的调控元件(SEE)、人巨细胞病毒即早期增强子(hCMVE)，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。