[发明专利]靶向长链非编码RNA DDX11-AS1的siRNA及其在肝癌治疗中的应用

说明书

本发明公开了一种靶向长链非编码RNA DDX11‑AS1的siRNA及其在肝癌治疗中的应用。通过设计并合成靶向DDX11‑AS1的siRNA，将其转染肝癌细胞系，证实利用siRNA靶向抑制DDX11‑AS1的表达可显著抑制肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移的能力并诱导肝癌细胞凋亡。本发明为肝癌治疗药物的研发提供了新靶点。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及靶向长链非编码RNADDX11-AS1的小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)及其在肝癌治疗中的应用。

背景技术

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，尤其在东亚、非洲和南欧地区发病率较高，全球发病率呈现逐年上升的趋势。由于肝癌发病隐匿，早期诊断困难，治疗后复发率和转移率较高且预后差，导致肝癌死亡率高居不下。目前，早期手术切除是肝癌最主要和最有效的治疗手段，但大部分患者初次诊断时肝癌就已进入中晚期，极大限制了手术治疗。另外，即便是成功实施手术切除的早期患者，其切除手术后肝癌复发率也很高，进而严重影响了患者的生存率和总体治疗效果。此外，尽管放疗、介入治疗和肝移植等治疗方法取得一定进展，但由于在应用中受到众多禁忌症的限制，其总体疗效仍然很难令人满意。

肿瘤分子靶向治疗作为一种新型疗法，已逐步成为临床肿瘤治疗的重要手段。由于分子靶向治疗是通过特异性分子干预(封闭或抑制)肿瘤发生关键基因及信号传导通路等分子靶点，从而抑制肿瘤细胞的生长、转移或诱导其凋亡，因此，与传统治疗手段相比，具有更好的精准性，能选择性地杀伤肿瘤细胞，对正常组织损伤较低或无损伤，副作用小，不易产生耐药性。目前，用于分子靶向治疗的分子靶向药物非常有限，其关键原因在于有效的分子靶点数量不足，迫切需要寻找新的特异性分子靶点。

长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸但缺乏蛋白编码能力的RNA分子，可通过多样化作用机制在表观遗传、转录以及转录后水平调节编码蛋白基因的表达。

LncRNA DDX11-AS1为一条与编码基因DDX11反向转录且非重叠的非编码转录本，位于12号染色体p11.21区域。DDX11-AS1可被c-MYC转录激活，且在多种癌组织中上调表达，通过作用姐妹染色单体粘连调控细胞周期进而参与肺癌、结肠癌肿瘤细胞的生长。目前，肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)作为原发性肝癌的主要类型，约占原发性肝癌的90％，DDX11-AS1是否参与肝癌的发生发展并作为HCC的潜在治疗靶点，目前无实验证据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向长链非编码RNA DDX11-AS1的siRNA及其在肝癌治疗中的应用。通过高效抑制LncRNA DDX11-AS1表达水平，应用于肝癌治疗。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明首先采用荧光定量PCR的方法对临床肝癌组织/癌旁组织、肝癌细胞系/正常肝细胞中的LncRNA DDX11-AS1表达水平进行了检测，发现与癌旁组织和正常肝细胞相比，DDX11-AS1在肝癌组织和肝癌细胞系中高表达；其次，针对DDX11-AS1基因序列设计并合成多条特异靶向DDX11-AS1的siRNA，采用脂质体介导的方法转染肝癌细胞后，通过荧光定量PCR的方法检测siRNA沉默DDX11-AS1的效率，同时采用CCK-8、Annexin-V/PI染色流式分析、Transwell等实验方法检测siRNA对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响，结果显示多条siRNA联合转染对DDX11-AS1具有较高的沉默效率，可显著抑制肝癌细胞的增殖与侵袭、迁移能力，同时促进肝癌细胞凋亡，即显著抑制肝癌细胞进展。

优选的，本发明提供的能高效抑制LncRNA DDX11-AS1表达的siRNA，为6条siRNA的混合物，6条siRNA的序列分别如SEQ.ID.NO.1至SEQ.ID.NO.6所示。