[发明专利]西瓜籽粒大小基因及其SNP分子标记和应用

权利要求书

1.一种西瓜籽粒大小相关的SNP位点的dCAPs分子标记，其特征在于，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.依据权利要求1所述SNP位点的dCAPs分子标记，其特征在于，所述引物酶切反应所用限制性内切酶为TagI。

3.一种西瓜籽粒大小基因型的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

a. DNA提取：利用CTAB法提取西瓜植株总DNA；

b. PCR扩增：

反应体系为：100 ng/μL西瓜植株总DNA 1μL、权利要求1所述上游引物 1 μL、权利要求1所述下游引物 1 μL、2×Power Taq PCR MasterMix 12.5 μL、ddH₂O 9.5 μL；

反应程序为：94℃ 5 min，35个循环的94℃ 20 s、55℃ 1 min、72℃ 30 s、72℃ 5min；

c. 酶切反应体系和程序：

反应体系为：PCR产物5 μl，TagI限制性内切酶0.5μl，10×buffer 1.5 μl，ddH₂O 8 μl；

反应程序为：65℃恒温处理10小时；

d.电泳图谱分析：对所述酶切产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、显影、染色和带型判读，找到目标条带，根据扩增产物的条带大小及位置关系确定所属基因型，142bp的条带代表大籽粒基因型，113bp的条带代表小籽粒基因型。

4.权利要求1所述的dCAPs分子标记在西瓜籽粒大小辅助筛选和育种中的应用。

5.依据权利要求4所述应用，其特征在于，包括如下步骤：

（1）对F₂群体每个株系利用权利要求1所述的dCAPs分子标记进行基因型鉴定；

（2）利用上述（1）中F₂群体的基因型鉴定结果，根据分子标记的基因型对不同单株进行分类，并利用籽粒表型数据进行鉴定和验证。