[发明专利]多重纳米乳疫苗佐剂的制备方法

说明书

本发明公开了一种多重纳米乳疫苗佐剂的制备方法，解决了现有疫苗佐剂注射困难、免疫力较低的问题。技术方案包括先将免疫增强剂溶于生理盐水中得内部水相；再将乳化剂和助表面活性剂溶解于非矿物油中，混匀，得中间油相；然后将内部水相缓慢加入到中间油相中，600～1200rpm的转速下自乳化，得稳定的油包水初乳；再将亲水性表面活性剂和亲油性表面活性剂加入到生理盐水中，磁力搅拌充分混匀，得外部水相；最后将油包水初乳加入到外部水相中乳化，得到多重纳米乳疫苗佐剂。本发明方法乳液稳定性好，黏度低(＜90mPa·s)，疫苗佐剂具有合理的控释、靶向和隔离特性。

技术领域

本发明涉及一种疫苗佐剂的制备方法，具体的说是一种多重纳米乳疫苗佐剂的制备方法。

背景技术

疫苗佐剂是指先于抗原或与抗原同时应用，能够非特异地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，以及增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身无抗原性的物质。佐剂能够诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应，提高机体保护能力，同时又能减少免疫物质的用量，降低疫苗的生产成本。

通常疫苗佐剂根据剂型分为三类，分别为水包油(O/W)型，油包水(W/O)型和水包油包水(W/O/W)型(又称多重乳液)。目前国内外公认的W/O/W型疫苗佐剂是ISA206，具有一定的稳定性，在全球范围内得到了广泛应用。其不足之处是所制备的ISA206佐剂的稳定性还不令人满意，且粒径较大，属于微米级别。而纳米乳是一类乳滴粒径尺度范围非常小(20～500nm)、外观呈透明或半透明、热力学稳定的分散体系。将纳米乳作为一种新型药物的的载体，能有效提高难溶性药物的溶解度，促进大分子药物在体内的吸收，从而提高药物的生物利用率，同时具有安全性高，稳定性好等优点，广泛用于医药领域。因此，通过纳米化技术制备稳定的W/O/W型疫苗佐剂具有极其重要的现实意义和市场价值。

CN103223164公开了一种水包油包水型佐剂疫苗及其制备方法。发明中使用免疫增强剂提高疫苗免疫效力，所述免疫增强剂为黄芪多糖注射液。该技术公开的是一种水包油包水型佐剂疫苗，粒径在1.0～3.9μm之间，且制备原料上仍选择白油，并需添加硬脂酸铝作为稳定剂，未提及所制疫苗对动物的安全性影响，容易导致疫苗在注射机体后注射阻力大，不易吸收，矿物油不易代谢，产生大量无菌脓肿和肉芽肿，对动物胴体品质造成不良影响。

CN101428145公开了一种纳米微粒佐剂及其制备方法和其在制备灭活疫苗中的应用。该技术公开的是一种水包油的纳米乳佐剂，虽然粒径在10～200nm之间，在制备过程中需经历高压均质处理过程，容易导致抗原效价降低甚至失活。不仅如此，虽然在文件中记载了可以使用动植物油替代矿物油，所述动植物油选自棉籽油、花生油、杏仁油或角鲨烯。但是其全部实施例使用的仍是“白油”，并无使用非矿物油的实施例。事实上，虽然本领域技术人员都知道采用非矿物油替代矿物油更利于动物体内代谢，但由于所采用的原料和制备工艺的不同，在乳液稳定性、黏度和粒径等方面，非矿物油相较于矿物油具有劣势，这也是动植物类非矿物油未在生产中应用的原因。

迄今为止，多重纳米乳疫苗佐剂的开发鲜有报道，这与其开发工艺的难度密切相关，现有技术的多重纳米乳疫苗佐剂由于配方成分、制备工艺不够合理，因此在使用环节仍存在注射困难、免疫力较低的缺陷。在这种情况下，迫切需要研制出一种高效疫苗佐剂，进而提高兽用疫苗的效力和免疫时间，将会为家畜养殖业预防疾病带来很广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述技术问题，提供一种工艺简单、易于生产、产品稳定性好、粒径小、黏度低、易于吸收降解、免疫增强效果好、对机体刺激性小的多重纳米乳疫苗佐剂。

1.按照以下步骤进行：

1)将免疫增强剂溶于生理盐水中，混匀，得内部水相；

2)将乳化剂和助表面活性剂溶解于非矿物油中，混匀，得中间油相；

3)将内部水相缓慢加入到中间油相中，600～1000rpm的转速下自乳化，得稳定的油包水初乳；