[发明专利]一种苏木素-伊红快速染色液及应用方法

说明书

本发明公开了一种苏木素伊红快速染色液及其应用方法，属于生物技术领域。具体的说该苏木素伊红染色液包含改良苏木素染色液和新型伊红染色液。本发明提供的苏木素伊红染色液操作简便，染色均匀，染色后的细胞结构清晰，细胞着色鲜艳，易于临床病理诊断观察判断。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种苏木素-伊红快速染色液，同时本发明还涉及该染色液应用方法。

背景技术

苏木素-伊红染色，简称HE染色，是病理组织切片最经常最广泛使用的一种常规染色法。苏木素容易被氧化，其氧化产物苏木红才是真正的燃料。习惯上称苏木素是碱性染料，实际上苏木红是一种酸性染料，只有苏木红和铝形成一种带正电荷的蓝色色精才是碱性的。带正电荷的蓝色色精和细胞核结合是通过正、负电荷的极性吸附来完成的，也就是说，带负电荷的脱氧核糖核酸根和带正电荷的蓝色色精进行极性吸附而完成染色。染色后必须进行分化和蓝化处理。所谓分化就是某些试剂，将过度染色的或不需要着色的组织成分上的颜色除去，所谓蓝化是指用明矾苏木素液深染细胞核后，通过盐酸乙醇分化，切片从酸性环境中转移至流水中使之变蓝的现象，本质上是染料苏木红加铝之间的结合或中断关系。一般来讲，在酸性环境中，使深蓝色的色精处于离子状态，此时为红色。这种现象称为色精形成中断，相反，红色离子状态的色精在碱性环境中处于结合状态，这种现象称色精形成，并呈现蓝色。

伊红Y是一种酸性红色胞浆性染料，含有1个醌型苯环的发色基和2个形成钠盐的酸性助色基，伊红Y溶于水中就能离解成带负电荷的色酸部分，即染料的有色部分；带正电荷的钠离子部分，即染料的无色部分。酸性染料组织成分呈弥漫性染色，这是由于组织成分的等电点一般都在3.6~5.2范围内，它们在弱酸性或弱碱性不可能进行极性吸附而完成染色，它们的染色可能是通过渗透作用或弥散作用而完成的，因此和组织成分结合是不牢固的，传统的苏木素-伊红染色过程中，易受组织固定、脱水、温度等因素的影响，导致以下问题：

1.细胞核着色较浅，轮廓不清并出现不同程度的片状发白区；

2.胞浆着色较淡，甚至不着色；

3.核浆共染，染色模糊，组织结构不清；

4.切片染色不均匀，出现点片状着色不良区；

5.切片不清晰，不透明；

6.切片染色不鲜艳，模糊。

发明内容

本发明为解决上述现有技术所存在的不足，提供一种快速染色的苏木素-伊红染色液及应用方法。该苏木素-伊红染色液配置简便，染色步骤简短，染后着色稳定，操作简单，染色效果显著。

具体来说：该苏木素-伊红染色液含有改良苏木素染色液和新型伊红染色液。

上述改良苏木素染色液，每升染色液其组分为：苏木色精0.5~5g，媒染剂2~20g，氧化剂0.01~1g，甲醇20~280ml，无水乙醇550~700ml，促染剂1~100ml，余量为纯化水。

上述新型伊红染色液，每升染色液其组分为：伊红Y醇溶5.5~8.2g，伊红Y水溶0.1~1.5g，橘黄G 0.1~2g，促染剂1~100ml，氨水15~200ml，无水乙醇750~950ml，余量为纯化水。

上述染色液中的媒染剂为十二水合硫酸铝钾、铁明矾中至少一种；所述氧化剂为黄色氧化汞、碘酸钠与高锰酸钾中至少一种；所述促染剂为氯化钠、硫酸钠、冰醋酸中至少一种。

本发明公开的新型伊红染色液使用水溶与醇溶伊红互补，水溶伊红易溶于水，溶液呈绿色荧光，使上皮细胞、肌肉纤维和细胞浆染色，醇溶性伊红能溶于碱，微溶于乙醇，吸附指示剂，不同的指示剂在不同的酸碱环境下呈现不同的颜色，使细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比，切片着色呈现明显的层次。