[发明专利]用于鉴定中华鲟亲缘关系的双重PCR微卫星标记及其鉴定方法有效
申请号: | 201810312498.3 | 申请日: | 2018-04-09 |
公开(公告)号: | CN108624699B | 公开(公告)日: | 2022-02-08 |
发明(设计)人: | 胡亚成;杜合军;杨菁;刘雪清;肖衎 | 申请(专利权)人: | 中国长江三峡集团公司中华鲟研究所 |
主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/686 |
代理公司: | 宜昌市三峡专利事务所 42103 | 代理人: | 成钢 |
地址: | 443100 *** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 鉴定 中华鲟 亲缘 关系 双重 pcr 卫星 标记 及其 方法 | ||
1.采用PCR微卫星标记引物鉴定中华鲟亲缘关系的方法,其特征在于,方法如下:
取中华鲟组织样品,提取中华鲟样品DNA;利用PCR微卫星标记引物对中华鲟样品DNA进行PCR扩增;把PCR扩增产物在聚丙烯酰胺胶上进行电泳分离;根据分离结果统计个体在所有微卫星位点中PCR扩增产物的基因型;根据个体的基因分型结果用NTsys软件画出各个个体之间的聚类分析图,确定个体之间的亲缘关系,PCR微卫星标记引物如下:
PCR反应体系是25ul:10×PCR Buffer 2.5ul,2.5mmol/L dNTP 0.5ul,MgCl2 1.5ul,反应体系中两对引物的上下游引物各1ul,Taq酶0.3ul,DNA模板3ul,超纯水13.2ul;
PCR反应程序为:94℃预变性3min;94℃变性30s,退火温度56℃复性30s,72℃延伸30s,30个循环;72℃延伸10min;4℃保存
PCR产物用质量浓度为8-15%的非变性聚丙烯酰胺胶进行电泳。
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