[发明专利]一种细胞cDNA芯片及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种细胞cDNA芯片，其特征在于，包括基片和固定于基片上的cDNA模板；

所述cDNA模板，是由细胞株或原代细胞抽提的总RNA经过反转录得到的cDNA；

所述cDNA芯片还具有管家基因引物，所述管家基因引物是管家基因的一对正向及反向引物，所述管家基因引物作为内参及阳性对照。

2.如权利要求1所述的细胞cDNA芯片，其特征在于，所述基片上具有阵列式分布的点样区间，所述点样区间用于固定cDNA模板；所述cDNA模板为两种或两种以上，是来源于两种或两种以上不同的细胞株或原代细胞；来源不同的cDNA模板固定于不同的点样区间。

3.如权利要求1所述的细胞cDNA芯片，其特征在于，固定于不同点样区间的cDNA模板的上样量保持一致，且控制内参qPCR结果Ct值波动不超过2。

4.如权利要求1所述的细胞cDNA芯片，其特征在于，所述总RNA在用于反转录之前应控制纯度，限定范围为：OD260/OD280的比值为2.0±0.1，OD260/OD230的比值为2.0-2.1。

5.如权利要求1所述的细胞cDNA芯片，其特征在于，所述总RNA在用于反转录之前应测定RNA的完整性，选择RIN值超过7的高质量的RNA进行反转录，得到cDNA。

6.如权利要求1所述的细胞cDNA芯片，其特征在于，所述管家基因为β-actin，其正向及反向引物为SEQ ID NO：1～2所示序列的核苷酸链或其互补链。

7.一种细胞cDNA芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)cDNA的获得：由细胞株或原代细胞抽提得到总RNA，纯化；检测和筛选RNA，RNA纯度限定范围为：OD260/OD280的比值为2.0±0.1，OD260/OD230的比值为2.0-2.1，RNA完整性的RIN值超过7；利用筛选出的RNA进行反转录，得到cDNA；

2)制备cDNA模板：将步骤1)得到的cDNA进行定量，以固定的上样量点样于基片上，确保内参qPCR结果Ct值波动不超过2；冻干后制备成cDNA模板。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述基片选用96孔PCR板或384孔PCR板；所述细胞cDNA芯片上覆盖有相应的PCR板覆膜。

9.一种由权利要求7所述的制备方法制备得到的细胞cDNA芯片。

10.一种使用如权利要求1或9所述的细胞cDNA芯片进行细胞株筛选的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)进行PCR反应：以细胞cDNA芯片固定的cDNA模板为PCR反应的模板，以管家基因引物为PCR反应的引物，配置PCR反应体系溶液，加入至cDNA阵列中，使冻干的cDNA模板充分溶解；将cDNA芯片放入PCR仪中进行PCR反应，PCR循环时的退火温度控制低于正向及反向引物的Tm值；此过程中上下游引物会特异的与cDNA的目的区域结合，并进行核苷酸链式聚合反应；

2)进行荧光收集，通过实时荧光定量的方法来检测目的基因的表达，计算各样本中目标基因与管家基因的△Ct值。