[发明专利]一种含羊水干细胞分泌物的培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种含羊水干细胞分泌物的培养基，其由4.9×10⁵个/ml经接种处理的羊水干细胞和基础培养基组成。本发明克服了传统的将现配含羊水干细胞应用于细胞治疗试验过程操作不便的种种弊端，其将含羊水干细胞分泌物与培养基相结合，实现了保存方便、可批量使用、无需临时现配、避免液氮保存需要适时复苏等，且可有效降低试验过程中细胞转移时受污染的可能性。本发明还可公开了该培养基在癌细胞检测中的应用，其具有促进癌细胞凋亡的作用，为日后临床使用奠定了基础。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别涉及一种培养基。

背景技术

羊水中的细胞是一群处于胚胎发育早期的细胞群，从中分离的羊水干细胞(Amniotic Fluid-derived Stem Cells，hAFSCs)是介于胚胎干细胞(Embryonic Stemcells，ES)和成体干细胞之间的细胞类型，表达ES细胞和成体干细胞的标志，具有相似的多向分化潜能，并且具有分化为三个胚层来源的不同细胞的能力。与胚胎干细胞不同的是，AFSCs在体内不形成肿瘤或畸胎瘤，且AFSCs不存在组织相容性和免疫排斥等问题。在未来治疗应用，再生医学以及研究中，使用AFSCs将会更加有利。

目前细胞治疗在临床中的使用越来越多，但是在细胞临床治疗使用中，细胞消耗量很大，并且有研究表明异体接种的细胞并没有在患者体内存活很久。伴随接种细胞的死亡，患者的疾病会得到不同程度的治疗，这就意味着细胞分泌的物质会在疾病治疗中起到一定的作用。MSCs的分泌物质对多种实验性器官和组织创伤模型如心肌梗塞、急性肾小管损伤、脑缺血和皮肤损伤有较好的促进创伤愈合和功能恢复的治疗效果，其作用机制主要是抑制细胞死亡、促进细胞分化、增殖而实现受损组织的修复。现有技术中将羊水干细胞引入到细胞治疗中已获得一定成效，然而因细胞治疗对细胞消耗量很大，而羊水干细胞在大量培养时容易存在未知病原体感染风险等问题，且培养成本很高，因此仍无法对其推广应用。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种含有羊水干细胞分泌物的培养基，同时提供该培养基在检测癌细胞上的应用。

本发明所采取的技术方案是：一种含羊水干细胞分泌物的培养基，其由4.9×10⁵个/ml经接种处理的羊水干细胞和基础培养基组成。

作为上述方案的进一步改进，所述基础培养基按质量百分比计由5％的人血清白蛋白注射液和95％的DMEM组成。

作为上述方案的进一步改进，所述羊水干细胞选自第三代的羊水干细胞。

作为上述方案的进一步改进，所述接种处理为将所述羊水干细胞置于明胶包被的细胞培养皿进行8h细胞贴壁处理后弃去上层液体，再用PBS洗涤三次。

作为上述方案的进一步改进，所述细胞培养皿为100mm的细胞培养皿。

一种如上所述的含羊水干细胞分泌物的培养基在癌细胞检测中的应用。

本发明的有益效果是：本发明克服了传统的将现配含羊水干细胞应用于细胞治疗试验过程操作不便的种种弊端，其将含羊水干细胞分泌物与培养基相结合，实现了保存方便、可批量使用、无需临时现配、避免液氮保存需要适时复苏等，且可有效降低试验过程中细胞转移时受污染的可能性。

本发明适用于细胞治疗过程中对癌细胞的检测，其具有促进癌细胞凋亡的作用，为日后临床使用奠定了基础。

附图说明

图1是本发明羊水干细胞的生长曲线图；

图2是本发明羊水干细胞表面标志物的免疫荧光鉴定结果图；

图3是本发明羊水干细胞的成脂成骨分化结果图；

图4是本发明羊水干细胞培养与癌细胞共培养过程中癌细胞的凋亡基因检测图。