[发明专利]一种Cre/loxP基因删除系统及其应用

权利要求书

1.一种Cre/loxP基因删除系统，其特征在于，包括植物表达载体I和II；植物表达载体I包括两个同向的loxP位点，所述的同向loxP位点间依次插入有目标基因I的表达元件和NCre的表达元件，所述NCre的基因序列如SEQ ID No.1所示；植物表达载体II包括两个同向的loxP位点，所述的同向loxP位点间插入有CCre的表达元件，所述CCre的基因序列如SEQID No.2所示。

2.一种如权利要求1所述的Cre/loxP基因删除系统，其特征在于，植物表达载体II的两个同向LoxP位点间还插入有目标基因II的表达元件，该表达元件位于CCre表达元件之前。

3.一种如权利要求2所述的Cre/loxP基因删除系统，其特征在于，所述NCre的表达元件包括启动子、NCre基因、内含肽基因In和终止子，所述启动子为花粉特异性启动子或胚珠特异性启动子，所述内含肽基因In的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.一种如权利要求3所述的Cre/loxP基因删除系统，其特征在于，所述CCre的表达元件包括启动子、内含肽基因IC、CCre基因和终止子，所述启动子为花粉特异性启动子或胚珠特异性启动子，其与控制NCre基因的启动子不具有同种特异性，所述内含肽基因IC的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

5.一种如权利要求4所述的Cre/loxP基因删除系统，其特征在于，所述花粉特异性启动子是指proACA9或proDLL，所述胚珠特异性启动子是指proDD45，proACA9的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，proDLL的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，proDD45的核苷酸序列如SEQID No.7所示。

6.一种如权利要求5所述的Cre/loxP基因删除系统，其特征在于，所述目标基因I和II的表达元件包括启动子、目标基因和终止子，所述启动子为CaMV35S，其核苷酸序列如SEQID No.8所示。

7.一种如权利要求6所述的Cre/loxP基因删除系统，其特征在于，所述目标基因是抗生物胁迫、抗非生物基因、提高农作物产量或改善农作物品质的基因。

8.一种如权利要求7所述的Cre/LoxP基因删除系统，其特征在于，所述NCre表达元件的启动子和NCre基因间依次插入有连接肽基因和报告基因，所述CCre表达元件的启动子和CCre基因间依次插入有连接肽基因和报告基因，连接肽为LP4/2A，报告基因为GFP或GUS，所述连接肽基因的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。

9.如权利要求1-8任一项所述的Cre/LoxP基因删除系统在生产无外源基因的果实或种子中的应用。

10.一种利用权利要求1-8任一项所述的Cre/LoxP基因删除系统生产无外源基因的果实或种子的制备方法，包括以下步骤：

(1)构建上述的植物表达载体I和II；

(2)将植物表达载体I导入植物基因组，制备转基因植物I；

(3)将植物表达载体II导入植物基因组，制备转基因植物II；

(4)将转基因植物I和II作为亲本互相杂交，获得无外源基因的果实或种子。