[发明专利]一种玉米小斑病高效抗病鉴定接种体及其制备方法

说明书

本发明提供一种玉米小斑病高效抗病鉴定接种体及其制备方法，接种体由以下重量比的原料组成：高粱100g、硫酸镁0.20～0.25g、磷酸钠0.20～0.25g、玉米叶15～30g，制备步骤包括：1）玉米小斑病强致病力菌株的筛选；2）玉米小斑病强致病力菌株的保存；3）二级菌种的配制；4）接种体的配制；5）接种体的培养。本发明具有以下优点：获得的用于玉米小斑病抗病性鉴定的菌株为强致病力、高纯度、高活力的菌株，为玉米抗病性接种鉴定提供保障；工作效率比平板培养基极大提高；避免小昆虫及杂菌的感染，获得高质量接种体成品；接种体的营养及其培养条件利于玉米小斑病菌分生孢子的产生，产孢速度快、产孢量大，产孢期长。

技术领域

本发明属于植物病原真菌研究技术领域，具体涉及一种玉米小斑病高效抗病鉴定接种体及其制备方法。

背景技术

玉米(Zea mays L.)是中国主要的粮、饲兼用作物，也是轻工、医药工业的重要原料,种植面积和总产量仅次于小麦和水稻，居第三位。

玉米小斑病(Southern corn leaf blight, SCLB)是全世界普遍发生的玉米重要病害之一，是我国温暖潮湿玉米产区的重要叶部病害，在玉米全生育期均可发生，病害发生高峰期为植株抽雄后，主要为害玉米叶片、叶鞘和苞叶, 轻者降低千粒重，重者导致果穗腐烂或下垂掉落、种子发黑、发芽率降低，一般可使玉米减产15%～20%, 严重时则减产50%以上。早在1925年定名前后，玉米小斑病的病害在世界各国就已有不同程度的发生。中国自20世纪60年代以后，随着感病杂交种的推广，玉米小斑病的危害日趋严重。利用抗病种质资源，选育和种植抗病品种是控制玉米小斑病流行的有效措施，在抗病品种的选育与利用过程中,抗病性鉴定已成为玉米育种及其区域适应性的一个常规工作，而获得大量分生孢子，或带大量分生孢子的接种体是该工作顺利进行的基础条件。

实验中通常采用高粱粒组织培养基来培养玉米小斑病分生孢子，方法为将平板培养基培养的病菌接种于经高压灭菌的高粱上，培养5～7d菌丝长满高粱粒后，用清水洗刷掉籽粒表面菌丝，紫外线照射30min，转放到方盘类器具内再进行室温黑暗培养；待产孢后即可进行玉米抗病鉴定接种。该方法通常能制备一定量的分生孢子，但产生分生孢子量不够多，且在培养过程中容易受到杂菌污染，滋长小昆虫。杨秀娟,陈福如等人发明“一种玉米小斑病菌产孢培养基及其制备方法和应用”（申请号：CN201510411758.9），用该方法培养的病菌产孢量约为等量PDA培养基产孢量的1.2～3.6倍。但该方法还是利用平板培养基进行产孢，其产孢、取孢操作过程繁琐，不便于大面积抗病鉴定操作，不能用带病菌组织进行接种。因此，寻找一种产孢效果好、成本低且操作简单、可以用带病菌组织进行接种的培养基及其培养方法，以产生大量孢子便于进行大面积抗病性接种鉴定，对开展大面积玉米小斑病抗病性接种鉴定具有重要意义。

在抗病鉴定实验中，通常采用随机分离得到的玉米小斑病菌作为供试菌株，但有时采用的菌株致病力不强，对抗病鉴定效果不理想；在病菌分离过程中，常采用稀释法进行单孢分离，不能确定是否得到单细胞纯培养。在病菌的保存中，常采用PDA培养基进行培养后保存，但因PDA培养基营养较高，病菌生长旺盛，保存后菌株的活力容易衰退。采用标记法进行单孢分离，经过致病力鉴定筛选菌株，用低营养培养基作为菌株保存基质，是保证菌株纯度和致病力及活力的保障。

因此，寻找一种无污染、分生孢子量大、致病力强、成本低且制备过程操作简单、可以用带病菌组织进行接种的接种体及其培养方法，对开展大面积玉米小斑病抗病性接种鉴定具有重要意义。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种快速、大量制备玉米小斑病高效抗病鉴定接种体及其方法。

为实现上述目的，本发明玉米小斑病高效抗病鉴定接种体，接种体由以下重量比的原料组成：高粱100g、硫酸镁0.20～0.25g、磷酸钠0.20～0.25g、玉米叶15～30g。

进一步地，所述的玉米小斑病高效抗病鉴定接种体的制备方法，步骤如下：