[发明专利]一种虾原肌球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其应用

说明书

本发明公开了一种虾原肌球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明的一株虾原肌球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株FB12‑1已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14690，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。以细胞株FB12‑1分泌的抗体7H6为包被抗体，抗体7H6标记HRP后为酶标抗体(7H6‑HRP)，以虾原肌球蛋白为标准品建立了检测虾原肌球蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法，在检测食品过敏原中的应用，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一种虾原肌球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

近年来,食物过敏已成为一个公众性的食品安全问题。食物过敏是人类常见的一种免疫性疾病，主要是由食物中蛋白质引起，由IgE介导的Ⅰ型超敏反应，其临床症状主要有水肿、皮炎、哮喘以及肠道综合症等，严重时会引发休克甚至危及生命，复杂食物样品中微量过敏原的检测和定量成为当务之急。甲壳类动物是联合国粮农组织提出的8大类易过敏食物之一，甲壳类动物主要过敏原为分子质量约为36-38kDa的虾原肌球蛋白。目前体外针对微量过敏原的检测方法有免疫学方法、蛋白组学法、PCR法、化学发光免疫方法。虽然目前有关过敏原检测的方法很多,但都存在各自不同的问题,如检测速度慢、成本高、检测需要特定的分析仪器等,制约了食品中过敏原检测方法的发展。因此实现准确、安全、经济、快速、高通量、高灵敏的体外检测技术方法具有现实意义。

与其他过敏原检测方法相比，酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆单体是重要前提。

发明内容

本发明的目的是提供虾原肌球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，建立检测虾原肌球蛋白的双抗体夹心ELISA法。

本发明的第一个目的是提供一种虾原肌球蛋白单克隆细胞株，已于2017年9月5日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为单克隆细胞株，保藏编号为 CGMCC No.14690，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究 所。

本发明的第二个目的是提供一种虾原肌球蛋白单克隆抗体，由保藏编号为CGMCCNo.14690的单克隆细胞株分泌产生。

本发明的第三个目的是提供虾原肌球蛋白单克隆抗体的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是用于食品中虾原肌球蛋白的分析检测。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是用于制备ELISA竞争法检测虾原肌球蛋白的试剂。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是以所述的虾原肌球蛋白单克隆抗体为包被抗体，抗体标记HRP后为酶标抗体，建立检测虾原肌球蛋白的双抗体夹心ELISA法，用此建立的双抗夹心法检测食品中虾原肌球蛋白，检测限为0.9ng/ml，具有实际应用价值。

本发明的第四个目的是提供制备所述虾原肌球蛋白单克隆细胞株的方法，是用虾原肌球蛋白免疫动物，从动物体内分离多克隆抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述虾原肌球蛋白杂交瘤细胞株的制备方法基本步骤为：

(1)虾原肌球蛋白过敏原的制备：制备虾蛋白浸提液、饱和硫酸铵分级沉淀、SDS-PAGE 鉴定虾原肌球蛋白、凝胶过滤层析分离得到高纯度蛋白。