[发明专利]一种促进枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖合成的方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌重组菌，其特征在于，所述重组菌整合表达了丙酮酸羧化酶BalpycA、甘油醛-3-磷酸铁氧还蛋白脱氢酶gapN、异柠檬酸NAD⁺脱氢酶icd、苹果酸醌脱氢酶mqo、丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶porAB和固氮酶铁蛋白cyh；所述重组菌是以枯草芽孢杆菌BSGNKAP2作为出发菌株，所述枯草芽孢杆菌BSGNKAP2如专利申请号为CN201610517961.9的专利申请所述；所述丙酮酸羧化酶BalpycA来源于蜡样芽胞杆菌，所述丙酮酸羧化酶BalpycA编码基因balpycA，如NCBI-ProteinID:AAS42897所示，所述甘油醛-3-磷酸铁氧还蛋白脱氢酶编码基因gor如NCBI-ProteinID:CAF30501所示；异柠檬酸NAD⁺脱氢酶编码基因icd如NCBI-Protein ID:AKC61181所示；苹果酸醌脱氢酶编码基因mqo如NCBI-Protein ID:ADK05552所示；丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶编码基因porAB如NCBI-ProteinID:ADK06337和NCBI-ProteinID:ADK06336所示；固氮酶铁蛋白编码基因cyh如NCBI-ProteinID:ACV00712所示。

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述丙酮酸羧化酶BalpycA编码基因balpycA使用强组成型启动子P₄₃表达。

3.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于，所述丙酮酸羧化酶BalpycA编码基因balpycA整合至枯草芽孢杆菌基因组malS位点。

4.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述甘油醛-3-磷酸铁氧还蛋白脱氢酶编码基因gapN、异柠檬酸NAD⁺脱氢酶编码基因icd、苹果酸醌脱氢酶编码基因mqo、丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶编码基因porAB和固氮酶铁蛋白编码基因cyh分别使用强组成型启动子P₄₃表达。

5.根据权利要求1或4所述的重组菌，其特征在于，所述甘油醛-3-磷酸铁氧还蛋白脱氢酶编码基因gapN、异柠檬酸NAD⁺脱氢酶编码基因icd、苹果酸醌脱氢酶编码基因mqo、丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶编码基因porAB和固氮酶铁蛋白编码基因cyh依次整合至枯草芽孢杆菌基因组pyk、ywkA、kdgA、melA和pckA位点。

6.一种权利要求1～5任一所述重组菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建蜡样芽孢杆菌的丙酮酸羧化酶BalpycA编码基因balpycA、甘油醛-3-磷酸铁氧还蛋白脱氢酶编码基因gor、异柠檬酸NAD⁺脱氢酶编码基因icd、苹果酸醌脱氢酶编码基因mqo、丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶编码基因porAB和固氮酶铁蛋白编码基因cyh的同源重组整合框；

(2)经同源重组，用步骤(1)中得到的整合框整合至枯草芽孢杆菌基因组中。

7.一种权利要求1～5任一所述重组菌制备乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述重组菌在种子培养基中活化，然后将活化后的种子转入发酵培养基，加入诱导剂进行发酵培养，得到乙酰氨基葡萄糖。