[发明专利]一种用于检测乙肝癌变多态性的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测乙肝癌变多态性的试剂盒，所述乙肝癌变易感基因检测的多态性位点为HLA‑DQrs9275319和STAT4rs2242480，所述试剂盒包括PCR反应液1、PCR反应液2、HLA‑DQ反向扩增引物、HLA‑DQ测序引物、载玻片、盖玻片、洗脱液和缓冲液。本发明方便观察结果，具有简便实用、特异性高、灵敏度强、适于基层单位及现场快速检测的优点。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，具体是一种用于检测乙肝癌变多态性的试剂盒。

背景技术

肝癌是全世界致死率高居第三的恶性肿瘤，也是中国常见的一种恶性疾病。全球每 年约有70万人死于肝癌。肝癌中肝细胞肝癌(Hepato Cellular Carcinoma，HCC)最常见， 国际癌症研究机构2000年的调查显示，HCC患者中80％与异性肝炎病毒和丙型肝炎病毒 有关。病史调查表明，中国的肝癌病人中80％以上都有乙肝病史。根据卫生部发布的数据，中国目前总计有9300万乙肝病人，占全世界乙肝患者总数的三分之一以上。

我国1992年普及乙肝疫苗注射后，肝癌发病率已有所下降。但在之前出生的人，约8％～9％呈乙肝表面抗原(HBsAg)阳性。因此，中国大陆在未来40～50年肝细胞癌仍将是一个重要的公共健康问题。由于原发性肝癌(HCC)患者出现临床表现常属疾病晚期，死亡率高，因此，筛查高危因素用于临床预测乙肝病毒感染的患者并发HCC的风险，有利于 疾病的早期发现和治疗。

主要组织相容性复合体(MHC)，参与免疫反应的调节，尤其是T细胞介导的细胞免疫 反应。人类MHC主要为人白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen，HLA)，位于人的6号染色体，分为Ⅰ类和Ⅱ类。MHCⅡ类分子只是在少数细胞中表达，如树突状细胞、B淋巴细 胞等，其中最具代表性的为HLA-DR和HLA-DQ抗原。HLA-DR，-DQ通过MHCⅡ类分子限制 的T细胞对外来抗原的识别，在介导淋巴细胞活化、抗原递呈等机体免疫应答和免疫调 节过程中发挥重要的作用。

全基因组关联研究表明，HLA-DQ基因簇上的SNPs与肝硬化、HBV和HCV引起的HCC风险性相关，尤其是位于与HCC具有生物学相关性的HLA-DQB1基因和HLA-DQA2基因之 间的rs9275319位点。信号转导和激活因子(STAT)家族是近年来发现的一类转录因子，包 括STAT1，STAT2，STAT3，STAT4，STAT5a，STAT5b，STAT6。STAT家族是介导细胞因子、 生长因子信号通路上启动蛋白转录的重要转录因子，它们在许多信号通路的细胞分子事 件中都起到重要作用，例如细胞分化、细胞增殖和存活。

STAT4位于染色体2q32.2-2q32.3，是T细胞，NK细胞，树突状细胞，核巨噬细胞等免疫调控细胞内IL-12/STAT4/IFN-γ信号传导途径的关键组成元件，是IL-12诱导免疫 调控细胞产生IFN-γ的关键调控因子，介导IL-12的免疫反应与调节T细胞的分化。国 外研究证实，STAT4基因多态性参与多种自身免疫性疾病的发生。STAT4通过信号传导， 使白细胞介素12诱导产生IFN-γ。IFN-γ是一种多效性细胞因子，在宿主防御中具有重 要的作用。由于STAT4基因多态性，激活的IFN-γ可能会降低它的抗病毒和抗肿瘤活性， 通过研究证实：STAT4中的G等位基因的单核苷酸多态性与乙肝癌变的高风险有关。

HLA-DQ基因和STAT4基因是乙肝患者罹患肝癌的关键易感基因，为人类进一步研究 如何降低肝癌发病风险、治疗乙肝和肝癌指出了新的方向。通过检测HLA-DQ基因和STAT4 基因的分型，筛查肝癌的易感人群，从而提前对易感人群进行相应的综合干预和预防措施， 降低肝癌发病风险。因此进行HLA-DQ和STAT4位点的基因分型检测对于预防乙肝癌变有 着非常重要的意义。