[发明专利]用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段

权利要求书

1.一种用于从单个细胞中产生异二聚体免疫球蛋白样分子的方法，其中所述免疫球蛋白样分子包含能够形成界面的两个CH3结构域，所述方法包括在所述细胞中提供：

a.编码第一含CH3结构域之多肽链的第一核酸分子，

b.编码第二含CH3结构域之多肽链的第二核酸分子，

其中，所述第一含CH3结构域之多肽链包含至少一个中性氨基酸残基被带正电的氨基酸残基的替换，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链包含至少一个中性氨基酸残基被带负电的氨基酸残基的替换，所述方法还包括培养所述宿主细胞并且使所述两种核酸分子能够表达以及从培养物中收获所述异二聚体免疫球蛋白样分子的步骤。

2.权利要求1所述的方法，其还包括为所述宿主细胞提供编码共同轻链的核酸分子。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述第一含CH3结构域之多肽链包含氨基酸替换T366K，并且其中所述第二含CH3结构域之多肽链包含氨基酸替换L351D。

4.权利要求3所述的方法，其中所述第一含CH3结构域之多肽链还包含氨基酸替换L351K。

5.权利要求3或4所述的方法，其中所述第二含CH3结构域之多肽链还包含选自Y349E、Y349D和L368E的氨基酸替换。

6.权利要求5所述的方法，其中所述第二含CH3结构域之多肽链还包含氨基酸替换L368E。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中污染性同二聚体的存在少于5％，优选少于2％，更优选少于1％，且最优选污染性同二聚体基本上不存在。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述含CH3结构域之多肽链还各自包含识别靶表位的可变区。

9.权利要求8所述的方法，其中所述含CH3结构域之多肽链的2个所述可变区各自识别不同的靶表位。

10.权利要求9所述的方法，其中所述不同的靶表位位于相同靶分子上。

11.权利要求10所述的方法，其中所述靶分子是可溶性分子。

12.权利要求10所述的方法，其中所述靶分子是膜结合分子。

13.权利要求9所述的方法，其中所述不同的靶表位位于不同的靶分子上。

14.权利要求13所述的方法，其中所述不同的靶分子在相同细胞上表达。

15.权利要求13所述的方法，其中所述不同的靶分子在不同的细胞上表达。

16.权利要求13所述的方法，其中所述不同的靶分子是可溶性分子。

17.权利要求13所述的方法，其中一种靶分子是可溶性分子，而第二种靶分子是膜结合分子。

18.权利要求8至10、12至15或17中任一项所述的方法，其中至少一种所述靶表位位于肿瘤细胞上。

19.权利要求8至10、12至15或17中任一项所述的方法，其中至少一种所述靶表位位于效应细胞上。

20.权利要求19所述的方法，其中所述效应细胞是NK细胞、T细胞、B细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞或嗜中性粒细胞。