[发明专利]一种维生素B12免疫法测定方法及其试剂

说明书

本发明是一种均相酶测定技术的免疫学检测的方法及其试剂，用于测定样品中维生素B12（Vitamin B12，VB12）的含量。该方法采用抗VB12特异性抗体、酶‑VB12复合物，利用酶‑VB12复合物与抗VB12特异性抗体免疫学反应，形成抗原抗体复合物后，酶‑VB12复合物活性受到抑制，通过测定反应体系中酶活性的变化，从而得到结合的酶标记物数量，从而得到待测样品中VB12的含量。该方法的优点是可以像普通生物化学酶方法一样，实现免疫学测定，从而在全自动生化分析仪上同时测定多个样品。

技术领域

本发明涉及到小分子与蛋白质定向连接、小分子成分和检测方法，属于医学免疫体外诊断领域。是基于均相的免疫学酶法测定。尤其涉及一种检测方法和试剂盒的制备，特别是一种VB12检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

维生素B12又称氰钴胺素、钴胺素、外源因子、动物蛋白因子，是唯一含有矿物质的维生素，是一种人体通过饮食获得的必需的营养物质，参与各种代谢过程，促进红细胞的成熟和维持神经系统的正常功能。其缺乏可以引起疲劳、头晕和味觉下降等各种临床表现，但由于症状较分散，容易被忽视，因此血中维生素B12浓度的检测对于判断维生素B12缺乏至关重要。自然界中的维生素B12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12。维生素B12在体内具有许多重要的生物学功能：

1、促进甲基转移；

2、促进红细胞的发育和成熟，使肌体造血机能处于正常状态，预防恶性贫血，维护神经系统健康；

3、以辅酶的形式存在，可以增加叶酸的利用率，促进碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢；

4、具有活化氨基酸的作用和促进核酸的生物合成，可促进蛋白质的合成，它对婴幼儿的生长发育有重要作用；

5、代谢脂肪酸，使脂肪、碳水化合物、蛋白质被身体适当运用；

6、消除烦躁不安，集中注意力，增强记忆及平衡感；

7、是神经系统功能健全不可缺少的维生素，参与神经组织中一种脂蛋白的形成。

大量的研究表明维生素B12贫乏也是巨幼红细胞性贫血症的诱因，同时也与老年痴呆症、抑郁症以及冠心病等有关。维生素B12缺乏也是怀孕早期流产、反复性流产的危险因素之一。近十年来，尤其随着多中心、大规模的社区随机对照研究的开展，表明检测维生素B1水平在贫血、神经系统疾病、出生缺陷、评价指标、营养强化等方面具有重要意义。

目前，定量测定VB12的方法，有微生物学法，高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光免疫分析法(CLIA)以及放射免疫法(RIA)。微生物法的优点是成本低，能够检测到极低浓度的叶酸或B12水平，缺点是由于微生物法不能够区分叶酸或B12，准确度较低，重复性较差，无法形成统一标准；高效液相色谱法，仪器昂贵，通量小，需要专业技术人员；放射免疫存在放射线辐射和污染等问题。酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光免疫分析法(CLIA)均受样本基质、缓冲体系以及pH影响较大，不同试剂盒检测结果偏差较大，不利于仪器自动化和标准化。