[发明专利]一种铜绿假单胞菌噬菌体内溶素及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种铜绿假单胞菌噬菌体内溶素，其特征在于：是如下(a)或(b)的蛋白质:

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有裂解革兰氏阴性菌功能的由(a)衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。

3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为编码权利要求1所述蛋白质的基因，所述基因为如下任一所示的DNA分子：

1)序列表中序列2所示的DNA分子；

2)与1)限定的序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子。

4.根据权利要求2，其特征在于，所述核酸分子是DNA或RNA。

5.含有权利要求2或3或4所述核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌。

6.根据权利要求5，其特征在于，所述重组载体可为重组表达载体，也可为重组克隆载体。

7.含有权利要求1所述铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1根据序列表中序列2设计特异性引物，从铜绿假单胞菌噬菌体基因组DNA中扩增人工铜绿假单胞菌噬菌体内溶素基因；

S2构建人工铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的重组表达载体；

S3将重组表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞，筛选得到表达人工铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的工程菌；

S4使用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导铜绿假单胞菌噬菌体内溶素工程菌表达，获得表达产物；

S5将重组基因表达产物，经镍柱亲和层析纯化分离，得到重组的人工铜绿假单胞菌噬菌体内溶素。

8.根据权利要求7所述铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的制备方法，其特征在于，步骤S1所述引物为：

上游引物:5’-GCGGATCCATGATCACCGACAGAGAGTATCAG-3’

下游引物:5’-GCCTCGAGTCAGCCACTAGCTTCAGCATA-3’。

9.权利要求1所述的蛋白质在抑制革兰氏阴性菌中的应用。

10.权利要求2或3所述的核酸分子在抑制革兰氏阴性菌中的应用。

11.权利要求5所述核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌在抑制革兰氏阴性菌中的应用。

12.权利要求1所述的蛋白质在如下(c1)或(c2)或(c1)、(c2)组合中的应用：

(c1)制备裂解大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌，洋葱伯克霍尔德菌和鼠伤寒沙门氏菌的产品；

(c2)制备用于治疗由大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌，洋葱伯克霍尔德菌和鼠伤寒沙门氏菌感染引起的疾病的产品。

13.权利要求3或4所述的核酸分子在如下(c1)或(c2)或(c1)、(c2)组合中的应用：

(c1)制备裂解大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌，洋葱伯克霍尔德菌和鼠伤寒沙门氏菌的产品；

(c2)制备用于治疗由大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌，洋葱伯克霍尔德菌和鼠伤寒沙门氏菌感染引起的疾病的产品。

14.权利要求5所述核酸分子的重组载体、表达盒或重组菌在如下(c1)或(c2)或(c1)、(c2)组合中的应用：

(c1)制备裂解大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌，洋葱伯克霍尔德菌和鼠伤寒沙门氏菌的产品；

(c2)制备用于治疗由大肠杆菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌，洋葱伯克霍尔德菌和鼠伤寒沙门氏菌感染引起的疾病的产品。